[发明专利]一种16种食源性致病菌检测试剂盒

权利要求书

1.一种16种食源性致病菌检测试剂盒，包括PCR扩增试剂和对照试剂，其特征在于：所述的PCR扩增试剂由PCR反应缓冲液A、酶系B和16种食源性致病菌的引物探针混合液构成，所述的对照试剂主要由阴性对照和阳性对照组成。

2.根据权利要求1所述的一种16种食源性致病菌检测试剂盒，其特征在于：所述的PCR反应缓冲液A的成分为5*Buffer，25mM dN(U)TPs，所述的酶系B主要由HotStart Hi TaqDNA聚合酶、UNG防污染酶构成，所述的16种食源性致病菌检测引物探针包含含沙门氏菌、志贺氏菌、肠致病性大肠杆菌、产毒素大肠杆菌、侵袭性大肠杆菌、黏附性大肠杆菌、大肠杆菌O157、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、蜡样芽孢菌、空肠弯曲菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌O1群、霍乱弧菌O139群、小肠结肠炎耶尔森菌和阪崎肠杆菌检测引物探针混合液。

3.根据权利要求1所述的一种16种食源性致病菌检测试剂盒，其特征在于：所述的5*Buffer的组分为50mM Tris-HCl、75mM KCl、12.5mM MgCl2，所述的dN(U)TPs的组分中dATP：dCTP：dGTP：dUTP＝1:1:1:2。

4.根据权利要求1所述的一种16种食源性致病菌检测试剂盒，其特征在于：所述的16种食源性致病菌的探针和引物的具体序列和序号如下：

沙门氏菌invA基因上游引物F：CGAGCAGTAATGGTATCTGC SEQ ID NO.1；

沙门氏菌invA基因下游引物R：GGAGGCTTCCGGGTCAAG SEQ ID NO.2；

沙门氏菌invA基因探针P：5’-荧光报告基团-CGCAAAGGGATCCGTCAGACCTCTGGCA-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.3；

志贺氏菌ipaH基因上游引物F：GCTCTCCACTGCCGTGAAGG SEQ ID NO.4；

志贺氏菌ipaH基因下游引物R：TCATTCTCTTCACGGCTTCTGA SEQ ID NO.5；

志贺氏菌ipaH基因探针P：5’-荧光报告基团-CGTGTCGGGAGTGACAGCAAATG-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.6；

EPEC eae基因上游引物F：ATGTTGCTTTGTTTAATTCCGA SEQ ID NO.7；

EPEC eae基因下游引物R：TAATCAAYCCCCATCGTCACC SEQ ID NO.8；

EPEC eae基因探针P：5’-荧光报告基团-CACCAACGGTCGCCGCRC-荧光淬基团-3’SEQ IDNO.9；

ETEC elt基因上游引物F：ATTTAAGAGCGGCGMAACA SEQ ID NO.10；

ETEC elt基因下游引物R：GTCCTTCATCCTTTCAATGGC SEQ ID NO.11；

ETEC elt基因探针P：5’-荧光报告基团-ACTGCCCGGGACTTCGACCTGA-荧光淬基团-3’SEQID NO.12；

ETEC est基因上游引物F：AGTAGCAATTACTGCTGTGAATTG SEQ ID NO.13；

ETEC est基因下游引物R：ACGTTACAGACATCATCAGAATC SEQ ID NO.14；

ETEC est基因探针P：5’-荧光报告基团-TTGTAATCCTGCTTGTACCGGGTGCT-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.15；

EIEC ipaH基因上游引物F：ACTCTCCATTTTGTGGATGAGATA SEQ ID NO.16；

EIEC ipaH基因下游引物R：TTCCTTCACGGCAGTGGAG SEQ ID NO.17；

EIEC ipaH基因探针P：5’-荧光报告基团-TACCTGGCCTTCCAGACCATGCT-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.18；

EAEC aggR基因上游引物F CTAAAGGATGCCCTGATGATAAT SEQ ID NO.19；

EAEC aggR基因下游引物R：ATACAGAATCGTCAGCATCAGC SEQ ID NO.20；

EAEC aggR基因探针P：5’-荧光报告基团-CCAATTCGGACAACTGCAAGC-荧光淬基团-3’SEQID NO.21；

O157rfbE基因上游引物F：CCAACACTGACATATATAGCATCA SEQ ID NO.22；

O157rfbE基因下游引物R：CAGACATTTGCCAAGTTTCATT SEQ ID NO.23；

O157rfbE基因探针P：5’-荧光报告基团-CACAGGAGCCACCCCCATTTTCG-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.24；

金黄色葡萄球菌nuc基因上游引物F：GAAGTCGAGTTTGACAAAGG SEQ ID NO.25；

金黄色葡萄球菌nuc基因下游引物R：ACTTTAGCCAAGCCTTGACG SEQ ID NO.26；

金黄色葡萄球菌nuc基因探针P：5’-荧光报告基团-CCATCAGCATAAATATACGCTAAGC-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.27；

单增李斯特菌hlyO基因上游引物F：ATGCTAGCACTACAAGAATTTCT SEQ ID NO.28；

单增李斯特菌hlyO基因下游引物R：TAACGCCATTGTCTTGCGCG SEQ ID NO.29；

单增李斯特菌hlyO基因探针P：5’-荧光报告基团-CGACTATGGTAGCGGAATTTCTCACGT-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.30；

蜡样芽孢菌16S rRNA上游引物F：AACATTTTGAACCGCATGGT SEQ ID NO.31；

蜡样芽孢菌16S rRNA下游引物R：CACCAACTAGCTAATGCGAC SEQ ID NO.32；

蜡样芽孢菌16S rRNA探针P：5’-荧光报告基团-CCATCCATAAGTGACAGCCGAAGCC-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.33；

空肠弯曲菌hipO基因上游引物F：CAATATGCCTTTTGGTAGCGA SEQ ID NO.34；

空肠弯曲菌hipO基因下游引物R：CACTTCCATGACTACCTCTTCC SEQ ID NO.35；

空肠弯曲菌hipO基因探针P：5’-荧光报告基团-CCGAAGAAGCCATCATCGCACC-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.36；

副溶血弧菌tlh基因上游引物F：CATGTACACCCACGCATTGC SEQ ID NO.37；

副溶血弧菌tlh基因下游引物R：CTCTGCAACATAGCGGTGAGT SEQ ID NO.38；

副溶血弧菌tlh基因探针P：5’-荧光报告基团-CTCAGCACCAGACGCCGCACACT-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.39；

霍乱弧菌O1群上游引物F：CAGTTTTTCTTCACATGCTGTCA SEQ ID NO.40；

霍乱弧菌O1群下游引物R：GGAAGAAGTGATGAAGGCGAT SEQ ID NO.41；

霍乱弧菌O1群探针P：5’-荧光报告基团-CTAGTGCCTTCCACATTCTCTCCG-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.42；

霍乱弧菌O139群上游引物F：CGATGGCGTGTTCATTAGAAGG SEQ ID NO.43；

霍乱弧菌O139群下游引物R：CACTTTCCCTTTCCACCTCG SEQ ID NO.44；

霍乱弧菌O139群探针P：5’-荧光报告基团-CGGCAAACTGGCAGCAAACTCAGCA-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.45；

小肠结肠炎耶尔森菌ail基因上游引物F：ACAGTTTCAGGGCAGTTCAGT SEQ ID NO.46；

小肠结肠炎耶尔森菌ail基因下游引物R：AATCACTACTGACTTCGGCTGG SEQ ID NO.47；

小肠结肠炎耶尔森菌ail基因探针P：5’-荧光报告基团-CCAATAACCGCTGAGGTATACAAGCAAGC-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.48；

阪崎肠杆菌alpha-1,6-glucosidase上游引物F：GATCTCAACTGGGAAAACCCG SEQ IDNO.49；

阪崎肠杆菌alpha-1,6-glucosidase下游引物R：CGATAACGTCCATGCGGAAA SEQ IDNO.50；

阪崎肠杆菌alpha-1,6-glucosidase探针P：5’-荧光报告基团-AGATCCACGCGATGATGAACCGCT-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.51。