[发明专利]苯丙氨酸羟化酶基因突变谱检测的特异性引物

权利要求书

1.一种苯丙氨酸羟化酶基因突变谱检测的特异性引物，其特征在于，包括13对引物，扩增区域为13个外显子及其侧翼区，引物序列分别为：

所述苯丙氨酸羟化酶基因C1位点，扩增区域为474-533，扩增引物序列是F1:acgaggggcgttactgtg和R1:ccaggaagcaccagcag；

所述苯丙氨酸羟化酶基因C2位点，扩增区域为4614-4863，扩增引物序列是F2:agagttcatgcttgctttg和R2:tggaagtttgctacgacat；

所述苯丙氨酸羟化酶基因C3位点，扩增区域为22600-22909，扩增引物序列是F3:gttaggttttcctgttctggt和R3:gtggagttacttatgttgca；

所述苯丙氨酸羟化酶基因C4位点，扩增区域为39910-40214，扩增引物序列是F4:ttgaacgatagtaatttggg和R4:aggtaagaggaagggag；

所述苯丙氨酸羟化酶基因C5位点，扩增区域为50823-51072，扩增引物序列是F5:accaagggaaggagacat和R5:caagggagaagcaggctag；

所述苯丙氨酸羟化酶基因C6位点，扩增区域为62189-62527，扩增引物序列是F6:ccccgactccctctgctaa和R6:cctctgcctcaatcctccc；

所述苯丙氨酸羟化酶基因C7位点，扩增区域64590-64874，扩增引物序列是F7:gtctcctagtgcctctgact和R7:gcaatgaacccaaacctc；

所述苯丙氨酸羟化酶基因C8位点，扩增区域65759-66029，扩增引物序列是F8:ctttctgcccattcctca和R8:tacctggtttccgctctt；

所述苯丙氨酸羟化酶基因C9位点，扩增区域70545-70748，扩增引物序列是F9:ctttctgcccattcctca和R9:tacctggtttccgctctt；

所述苯丙氨酸羟化酶基因C10位点，扩增区域73035-73438，扩增引物序列是F10:tccagaaacaccctcata和R10:cacagccatcatcaaatc；

所述苯丙氨酸羟化酶基因C11位点，扩增区域73972-73700，扩增引物序列是F11:ttgggctgtgatgtagaag和R11:tgtcaccacctcaccttact；

所述苯丙氨酸羟化酶基因C12位点，扩增区域77275-76978，扩增引物序列是F12:tagggaggtgtccgtgtt和R12:gcgatggtagggaaaga；

所述苯丙氨酸羟化酶基因C13位点，扩增区域78520-78309，扩增引物序列是F13:gctttgcactgaggacact和R13:aggtttgcttttcggacttt。

2.根据权利要求1所述的一种苯丙氨酸羟化酶基因突变谱检测的特异性引物，其特征在于，所述苯丙氨酸羟化酶基因C1位点、C2位点、C3位点、C4位点、C5位点、C6位点、C7位点、C8位点、C9位点、C10位点、C11位点、C12位和C13位点的扩增引物序列，其退火温度分别为64℃、60℃、60℃、58℃、59℃、64℃、59℃、50℃、57℃、55℃、60℃、61℃和62℃。

3.根据权利要求1所述的一种苯丙氨酸羟化酶基因突变谱检测的特异性引物，其特征在于，所述苯丙氨酸羟化酶基因C1位点、C2位点、C3位点、C4位点、C5位点、C6位点、C7位点、C8位点、C9位点、C10位点、C11位点、C12位和C13位点的扩增引物序列，其分别依次位于Exon1、Exon2、Exon3、Exon4、Exon5、Exon6、Exon7、Exon8、Exon9、Exon10、Exon11、Exon12和Exon13及各外显子侧翼区。

4.一种权利要求1-3任一项所述检测引物的应用，其特征在于，具体包括步骤：

1)利用PCR-SSCP确定PAH热点突变区域；

2)利用PCR直接测序法，在步骤1)确定的热点突变区域对全部样本扩增，将PCR产物直接Sanger测序。