[发明专利]一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物及其制备方法

权利要求书

1.一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，其特征在于，

包括如下步骤：

步骤一，通过同源重组的方式，将SchS10糖基转移酶基因进行失活处理；

所述SchS10为合成Sch47554和Sch47555过程中使用的糖基转移酶基因，

所述Sch47554和Sch47555是由链霉菌Streptomyces sp.SCC-2136或ATCC 55186产生的抗生物；

步骤二，使用干扰质粒进行抗性筛选，形成链霉菌Streptomyces sp.SCC-2136/ΔschS10菌株；

步骤三，对链霉菌Streptomyces sp.SCC-2136/ΔschS10菌株进行培养；

步骤四，对培养物进行破碎处理，再用提取剂对培养物进行提取，真空干燥得到提取物；

步骤五，对提取物进行初步分离，初步分离的各部分再进一步用高效液相色谱法进行分离，得到OZK1和OZK2化合物；

OZK1化合物的结构式为：

OZK2化合物的结构式为：

2.根据权利要求1所述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，其特征在于，

包括如下步骤：

步骤一，通过同源重组的方式，将SchS10糖基转移酶基因进行失活处理；

所述SchS10为合成Sch47554和Sch47555过程中使用的糖基转移酶基因，

所述Sch47554和Sch47555是由链霉菌Streptomyces sp.SCC-2136或ATCC 55186产生的抗生物；

步骤二，对成功被失活的SchS10糖基转移酶基因使用干扰质粒进行抗性筛选，形成链霉菌Streptomyces sp.SCC-2136/ΔschS10菌株；

步骤三，对链霉菌Streptomyces sp.SCC-2136/ΔschS10菌株进行培养；

步骤四，提取链霉菌Streptomyces sp.SCC-2136/ΔschS10菌株的培养物中的各类基因片段进行PCR扩增，采用的引物如下所示：

步骤五，对培养物进行破碎处理，再用提取剂对培养物进行提取，真空干燥得到提取物；

步骤六，对提取物进行初步分离，初步分离的各部分再进一步用高效液相色谱法进行分离，得到OZK1和OZK2化合物。

3.根据权利要求2所述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤四中的基因提取采用真菌/细菌DNA微量提取试剂盒。

4.根据权利要求1所述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤二中的干扰质粒为pRY10，所述pRY10携带有抗阿伯拉霉素基因；所述pRY10干扰质粒的制备过程为：aac为抗阿伯拉霉素基因，将目标片段schS10插入到原质粒的表达启动区域lacZ的插入位点之间，插入位点为HindIII和XbaI。

5.根据权利要求1所述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，其特征在于，步骤三，对链霉菌Streptomyces sp.SCC-2136/ΔschS10菌株进行培养；具体培养过程为：将链霉菌Streptomyces sp.SCC-2136/ΔschS10菌株在YM平板上进行培养，添加阿伯拉霉素，28℃，10天；再将链霉菌Streptomycessp.SCC-2136/ΔschS10在YM平板上培养5天。

6.根据权利要求1所述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤四中的提取剂的质量百分比的组份为：89％乙酸乙酯、10％甲醇，1％乙酸。

7.根据权利要求1所述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，其特征在于，步骤五中的初步分离采用的方法为：使用硅胶柱在不同比例的氯仿/甲醇溶液处理下进行分离。

8.根据权利要求1所述的一种具有抗生作用的OZK1和OZK2化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，将UMW6经过拜耳-维立格氧化反应得到SHUNT

步骤二，将SHUNT经过还原反应得到

步骤三，将步骤二得到的产物在酸性环境下经过质子化作用得到

步骤四，将步骤三得到的产物经过6-还原，5、6-脱水，12-氧化，得到

步骤五，将步骤四得到的产物经过SchS7糖基转移酶将通过糖基化作用连接至其结构上，得到3'-Deoxyaquayamycin

步骤六，将步骤五得到的产物经过SchS9糖基转移酶将或通过糖基化作用连接至其结构上，得到：OZK1和OZK2