[发明专利]纳豆菌及其在发酵菲律宾蛤仔制备活性多糖中的应用

权利要求书

1. 利用枯草芽孢杆菌纳豆亚种（Bacillus subtilissubsp .natto）PS-I-HepG2发酵菲律宾蛤仔制备的活性多糖用于制备抗肿瘤功能性食品，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌纳豆亚种（Bacillus subtilissubsp .natto）PS-I-HepG2的保藏编号为CCTCC NO：M2018080；所述肿瘤为肺癌、肝癌。

2.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌纳豆亚种PS-I-HepG2发酵菲律宾蛤仔制备活性多糖的方法，其特征在于，具体步骤如下：

（1）菲律宾蛤仔预处理：选取鲜活蛤仔，经清水吐沙后于蒸锅中微蒸，待外壳张开后取肉、打成匀浆；

（2）种子菌悬液的制备：将保藏的枯草芽孢杆菌纳豆亚种PS-I-HepG2菌种活化，从斜面上挑1~2环菌种接种到装有种子液体培养基的三角瓶中，于30~40°C，160~230r/min下摇床培养18~24h，制得种子菌悬液；

（3）发酵：按照料液比为1:2~1:5的比例在蛤仔肉中加入蒸馏水，高温灭菌后接入1%~9%的步骤（2）制备的种子菌悬液；置于34~45°C恒温箱中摇床发酵24~72h；

（4）浸提；

（5）醇沉、除蛋白；

（6）超滤；

（7）冻干：将超滤得到的糖溶液冷冻干燥，得到菲律宾蛤仔多糖粉末。

3.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌纳豆亚种PS-I-HepG2发酵菲律宾蛤仔制备活性多糖的方法，其特征在于，所述步骤（4）浸提的步骤如下：向步骤（3）的发酵物中加入发酵液体积4～5倍的蒸馏水，在65~75°C条件下浸提4~8h，离心，取上清液，备用。

4.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌纳豆亚种PS-I-HepG2发酵菲律宾蛤仔制备活性多糖的方法，其特征在于，所述步骤（5）醇沉、除蛋白的步骤如下：将步骤（4）所述上清液旋转蒸发至原体积的1/3~1/5，加入5~8体积的95%乙醇，进行醇沉，4~8°C冰箱中放置过夜，次日取出，倾倒上层乙醇溶液，4000~6000r/min离心15~25min收集沉淀，将所得沉淀溶于水，再加乙醇沉淀，重复操作两次，离心分离，收集沉淀物；Sevag法除蛋白。

5.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌纳豆亚种PS-I-HepG2发酵菲律宾蛤仔制备活性多糖的方法，其特征在于，所述步骤（6）超滤的步骤如下：采用5KD的膜超滤3~5次除去无机盐离子和小分子肽类，并进行浓缩。