[发明专利]抗病转基因大豆事件B5B9104-3外源插入片段侧翼序列及其应用

说明书

本发明提供一种抗病转基因大豆事件B5B9104‑3外源插入片段侧翼序列及其应用，属于植物生物技术领域。具体地，涉及一种广谱抗花叶病毒转基因大豆事件B5B9104‑3外源插入片段左、右边界侧翼序列及其应用。本发明公开的转基因大豆事件B5B9104‑3外源插入片段左边界侧翼序列如SEQ‑2所示，右边界侧翼序列如SEQ‑3所示。本发明公开的转基因大豆事件B5B9104‑3外源插入片段侧翼序列可以用作目标DNA序列，建立该转基因事件特异性检测方法。本发明提供的外源插入片段侧翼序列及检测方法适用于对该转基因大豆事件包括亲本、衍生品系或品种，及其制品包括植株、组织、种子及产品的特异性检测。

技术领域

本发明涉及植物生物技术领域，具体地，涉及一种广谱抗花叶病毒转基因大豆事件B5B9104-3外源插入片段侧翼序列及其应用。

背景技术

马铃薯Y病毒属(Potyvirus)是植物病毒中最大的一个属，包括约200种确定种和暂定种。该类病毒可以侵染茄科、藜科、豆科、葫芦科等多种植物，并造成严重的产量损失。大豆花叶病毒(soybean mosaic virus，SMV)、菜豆普通花叶病毒(bean common mosaicvirus，BCMV)和西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus，WMV)均属于马铃薯Y病毒属。三种病毒均可以通过种子带毒或蚜虫进行传播，并造成花叶、叶片卷曲、植株矮化等症状(Gaoet al.2015；Yang et al.2014)。SMV是影响大豆生产的主要病毒性病害，也是我国各大豆主产区最重要的病害之一。SMV一般可造成大豆减产10％～35％，严重年份和地区甚至造成大面积绝产(Yang et al.2013，2014；Ross 1983)。SMV的侵染通常造成大豆籽粒斑驳，严重影响籽粒的外观品质和商品价值。国外通过SMV对鉴定寄主的致病性反应将SMV株系划分为G1-G7(Cho and Goodman 1979)，我国将SMV株系划分为SC1-SC22(Li et al.2010；Wang etal.2003)。由于化学防治困难且易造成环境安全等问题，生产上对大豆花叶病毒的防治主要依赖于抗SMV大豆品种的培育。另外2种病毒-BCMV和WMV虽然在大豆生产中发生情况并不严重，但对大豆生产仍具有较大的潜在危害(Zhou et al.2014)，特别是BCMV、WMV与SMV之间的协同互作，常常造成SMV株系的变异和更为严重的产量损失(Anjos，et al.1992；Reddy，et al.2001)。目前生产上主要利用携带SMV抗性位点(Rsv1，Rsv3，Rsv4)的大豆品种控制SMV的危害(Yu，1994；Hayes，et al.，2000；Gore，et al.，2002；Jeong and Maroof，2008；Maroof，et al.，2010)。但由于抗性品种的广泛种植造成的正向筛选压力、SMV基因组变异及SMV与寄主或其他侵染大豆病毒之间的互作，造成抗病品种原有抗性的逐渐丧失(Koo，et al.，2005；Choi，et al.，2005；Gagarinova，et al.，2008)。有报道表明，部分SMV小种对携带Rsv1、Rsv3和Rsv4抗性基因的商业化大豆品种均产生抗性(Choi，et al.，2005)。SMV的广泛变异及多个SMV株系或其他病毒如BCMV的混合感染使得大豆病毒性病害防治愈加困难。