[发明专利]抗病转基因大豆事件B5B9104-3外源插入片段侧翼序列及其应用

权利要求书

1.广谱抗花叶病毒转基因大豆事件B5B9104-3外源插入片段左边界和右边界侧翼序列，其特征在于，外源插入片段左边界侧翼序列如SEQ-2所示，外源插入片段右边界侧翼序列如SEQ-3所示，由来源于大豆基因组序列和来源于外源插入片段序列组成的DNA序列；其中：

外源插入片段左边界侧翼序列特征包括：

(1)SEQ-2第1-480位点序列来源于栽培大豆品种沈农9号基因组序列；

(2)SEQ-2第481-1200位点序列来源于外源插入片段序列；

外源插入片段右边界侧翼序列特征包括：

(1)SEQ-3第1-582位点序列来源于外源插入片段序列；

(2)SEQ-3第583-1294位点序列来源于栽培大豆品种沈农9号基因组序列。

2.权利要求1所述外源插入片段左、右边界侧翼序列的制备方法，其特征在于，提取转基因大豆事件B5B9104-3基因组DNA，利用基因组重测序技术分析确定外源片段插入位点，并通过PCR扩增获得。

3.权利要求1所示侧翼序列在建立转基因大豆事件B5B9104-3特异性检测方法或制备检测试剂盒中的应用，其特征在于，依据权利要求1所示侧翼序列，制备特异性引物或探针。

4.权利要求1所述侧翼序列、权利要求3所述特异性检测方法或检测试剂盒在转基因大豆事件B5B9104-3检测中的应用，其中，检测对象包括亲本、衍生品系或品种，及其制品或产品。

5.权利要求3或权利要求4所述特异性检测方法，其特征在于，其中一条引物为依据SEQ-2第1-480位点序列设计的正向引物，另一条引物为依据SEQ-2第481-1200位点序列设计的反向引物，即所述两条引物组合为权利要求1所述外源插入片段左边界侧翼序列特异性检测引物。

6.权利要求3或权利要求4所述试剂盒，其特征在于，其中一条引物为依据SEQ-2第1-480位点序列设计的正向引物，另一条引物为依据SEQ-2第481-1200位点序列设计的反向引物，即所述两条引物组合为权利要求1所述外源插入片段左边界侧翼序列特异性检测引物。

7.根据权利要求5所述外源插入片段左边界侧翼序列特异性检测引物，其特征在于：如SEQ-4和SEQ-5所示：

所述正向引物SEQ-4为：5’-GAAAAAACACATTATTCCATGTGGAGAAG-3’

所述反向引物SEQ-5为：5’-TGAGCAACTTGAAATGATTTCAGAAACTTC-3’。

8.权利要求3或权利要求4所述特异性检测方法，其特征在于，其中一条引物为依据SEQ-3第1-582位点序列设计的正向引物，另一条引物为依据SEQ-3第583-1294位点序列设计的反向引物，即所述两条引物组合为权利要求1所述外源插入片段右边界侧翼序列特异性检测引物。

9.权利要求3或权利要求4所述检测试剂盒，其特征在于，其中一条引物为依据SEQ-3第1-582位点序列设计的正向引物，另一条引物为依据SEQ-3第583-1294位点序列设计的反向引物，即所述两条引物组合为权利要求1所述外源插入片段右边界侧翼序列特异性检测引物。

10.根据权利要求8所述外源插入片段右边界侧翼序列特异性检测引物，其特征在于，如SEQ-6和SEQ-7所示：

所述正向引物SEQ-6为：5’-TTCCACACAACATACGAGCCG-3’

所述反向引物SEQ-7为：5’-TGGGGAAAAATACATATTAGAACACTG-3’。