[发明专利]一种PRLR基因的应用及其方法

说明书

本公开了一种PRLR基因的新应用及其方法，本发明利用Z染色体存在的176,324 bp串联重复序列与鸡快慢羽位点的连锁关系，采用荧光定量PCR方法对羽速基因候选基因PRLR和内参基因PCCA之间拷贝数变异的鉴定，反应结束后便可简洁直观的根据两者Ct值的差异判定基因型，实现同时区分鸡快慢羽基因型、慢羽纯/杂合性及雏鸡雌雄，同时本技术实验操作更为简便，可极大的降低选育快慢羽纯系鸡的育种时间与成本。

技术领域

本发明属于动物育种技术领域，具体涉及一种鸡的快慢羽分子鉴定方法及应用。

背景技术

雌雄鉴别是现代养鸡生产中的重要技术，广泛应用于商品蛋鸡、肉鸡及种鸡生产中，以便淘汰公雏节约饲养成本、分性别饲养管理及提供单性别的种雏鸡保护育种成果。在地方鸡种生产中，公母的生长发育速度存在较大的差异，分群饲养管理更有利于提高经济收益。

翻肛鉴定和自别雌雄是目前常用的两类雌雄鉴别方法。翻肛鉴定是利用公、母雏退化交尾器的差别进行鉴定，即通过目测是否存在生殖突起进行区分公母，需对雌雄鉴别员进行特殊培训。而自别雌雄则利用位于鸡性染色体(Z染色体)上基因的伴性交叉遗传现象，在特定的交配模式下根据雏鸡出壳时的表型差异鉴定出壳雏鸡的性别。慢羽(K)对快羽(k)为显性，利用快羽公鸡(Z^kZ^k)与慢羽母鸡(Z^KW)交配，后代公雏全为慢羽(Z^KZ^k)，母雏全为快羽(Z^kW)，实现了雏鸡自别雌雄。快慢羽表型指在雏鸡出壳24小时以内，主翼羽长于覆主翼羽2mm以上为快羽型，其余为慢羽型。由于位于Z染色体的快慢羽位点不受鸡品种遗传背景限制，适合在不同鸡品种中应用推广。相比翻肛性别鉴定方法，其鉴别速度快，准确率高，不需要对鉴别人员进行技术培训，对雏鸡损伤小，交叉感染疾病的可能性小，因而在鸡雌雄鉴别中被广泛使用。

种鸡场建立快羽公鸡(Z^kZ^k)与慢羽母鸡(Z^KW)纯系是实现快慢羽自别雌雄的核心步骤。快羽公鸡纯系可由快羽公鸡和快羽母鸡交配获得，但慢羽纯系需要准确区分慢羽纯合和慢羽杂合公鸡，利用慢羽纯合公鸡与慢羽母鸡交配获得。由于慢羽为显性，因此，传统育种中需要对慢羽公鸡进行测交鉴定是慢羽纯合型还是慢羽杂合型，育种周期较长，建系投入较大。此外，利用快慢羽自别雌雄一般不能超过出壳后24小时。这使得快慢羽自别雌雄配套系建系时需从雏鸡开始，需要2-3个世代才能形成后代达到一定自别雌雄准确率(一般要求99％以上)的配套系，限制该技术推广应用。

利用在鸡Z染色体上找到的K基因位点相关序列变异进行快慢羽基因型鉴别已有报道，国内北京市华都峪口禽业有限责任公司的《鸡快慢羽基因型的鉴别方法及雏鸡雄雌鉴别方法技术》专利中，对鸡血样中的DNA进行PCR扩增，扩增引物为：正向引物F:5’-GCACATTCAAGTAAGCAGTAGTTT-3’，反向引物R:5’-AAAAAAAAAAAAAATTGCACTTTAATAGTACCATCTATTC-3’，获得长度为171bp的扩增产物，以Taq I内切酶对扩增产物进行酶切，存在长度分别为132bp和39bp的两种片段的，为慢羽纯合；存在长度分别为171bp、132bp和39bp的三种片段的，为慢羽杂合；扩增产物经酶切后只存在长度为171bp的片段的，为快羽纯合。而《鸡快慢羽分子鉴定方法》专利中，根据快慢羽等位基因的结构设计两对引物；提取已知快慢羽的鸡血样DNA，进行引物特异性实验，根据扩增DNA片段大小和有无来鉴定鸡是快羽还是慢羽。当只扩增出一条350bp带，判定该鸡为快羽型；当扩增出两条带350bp和909bp，确定为慢羽型。这两种方法虽然可以区分快羽、慢羽基因型，但对出壳雏鸡仍无法直接实现公母的区分；这两种方法在PCR扩增后需要酶切电泳或电泳进行基因型确定，试验操作相对比较繁琐。

发明内容