[发明专利]进行核酸稳定和分离的方法在审

申请号：	201780068999.5	申请日：	2017-11-08
公开（公告）号：	CN110191960A	公开（公告）日：	2019-08-30
发明（设计）人：	萨马德·泰勒普尔;耶耶·凯尼	申请（专利权）人：	克维拉公司
主分类号：	C12Q1/6806	分类号：	C12Q1/6806;C12N1/06;C12N15/10
代理公司：	北京英赛嘉华知识产权代理有限责任公司 11204	代理人：	王达佐;洪欣
地址：	加拿大***	国省代码：	加拿大;CA
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摘要：
搜索关键词：	复合物核酸阳离子去污剂核酸溶液悬浮物重悬液扩增裂解表面活性剂热处理分离核酸核酸提取核酸稳定离心沉淀稳定试剂样品稳定释放标志物转录组重悬洗涤分解细胞学生
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【说明书】：

提供了通过将样品与包含阳离子去污剂的裂解稳定试剂接触，而从样品稳定并分离核酸的方法。阳离子去污剂裂解样品中的细胞，并通过形成核酸‑表面活性剂(NAS)复合物来稳定释放的核酸。将NAS复合物离心沉淀、洗涤、重悬于水重悬液中，形成NAS复合物悬浮物。将悬浮物热处理以分解NAS复合物，从而释放核酸并形成核酸溶液。在一些示例性的实施方案中，选择水重悬液以适合于进行分子扩增测定，以便可以采用核酸溶液进行分子扩增测定，而无需进一步的核酸提取。提供了实例，从而使本发明的方法用于进行转录组学生物标志物测定。

相关申请的交叉引用

本申请要求标题为“进行核酸稳定和分离的方法(METHODS OF PERFORMINGNUCLEIC ACID STABILIZATION AND SEPARATION)”，且于2016年11月8日递交的第62/419,340号美国临时申请的优先权，其完整内容通过引用并入本文中。

背景技术

本公开涉及从样品分离核酸的方法。在一些方面，本公开涉及快速转录组学分析的方法，包括对全血样品进行快速mRNA生物标志物测定。

已知阳离子去污剂(表面活性剂)适合作为用于裂解样品中的细胞、以及用于稳定诸如各种形式的RNA的核酸的试剂。例如，在第5,010,183号和第5,728,822号美国专利中，Macfarlane教导了此类方法，当阳离子去污剂与样品混合时，有效裂解样品内的细胞，同时与从细胞释放的核酸形成复合物，其稳定核酸并防止基因诱导。不幸的是，如本领域所教导的，此类释放核酸的复合物的随后处理需要复杂步骤，包括核酸提取，其在自动化系统中难以实施。

发明概述

本文提供了通过将样品与包含阳离子去污剂的裂解稳定试剂接触，而从样品中稳定并分离核酸的方法。阳离子去污剂裂解样品中的细胞，并通过形成核酸-表面活性剂(NAS)复合物而稳定所释放的核酸。将NAS复合物离心沉淀、洗涤、重悬于水重悬液中，形成NAS复合物悬浮物。将悬浮物热处理以分解NAS复合物，从而释放核酸并形成核酸溶液。在一些示例性的实施方案中，选择水重悬液以适合进行分子扩增测定，以便可以将核酸溶液用于进行分子扩增测定，而无需进一步的核酸提取。本文提供了实例，从而使本发明方法用于进行转录组学生物标志物测定。

因此，在第一个方面，提供了处理样品以从中释放核酸的方法，所述方法包括：

形成包含样品和裂解稳定试剂的混合物，所述裂解稳定试剂包含阳离子去污剂，所述阳离子去污剂能够裂解样品中存在的细胞，并与从细胞释放的核酸形成复合物，其中所述裂解稳定试剂以足以稳定并防止核酸降解的量提供；

从混合物分离复合物；

将分离的复合物重悬于水溶液中，从而获得包含分离的复合物的水悬浮物；以及

加热水悬浮物至50摄氏度以上的温度，其持续的时间适合离解复合物，从而从中释放核酸。

在另一个方面，提供了对样品进行分子测定以检测从中释放的核酸的方法，所述方法包括：

a)形成包含样品和裂解稳定试剂的混合物，所述裂解稳定试剂包含阳离子去污剂，所述阳离子去污剂能够裂解样品中存在的细胞，并与从细胞释放的核酸形成复合物，其中所述裂解稳定试剂以足以稳定和防止核酸降解的量提供；

b)从混合物分离复合物；

c)将分离的复合物重悬于水溶液中，从而获得包含分离的复合物的水悬浮物；

d)加热水悬浮物至50摄氏度以上的温度，其持续的时间适合于离解复合物，从而形成包含从复合物释放的核酸的核酸溶液；以及

e)进行测定以检测核酸溶液中存在的核酸，其中所述测定在无核酸提取的情况下进行。

可以通过参考以下详细描述和附图实现对本公开的功能和有利方面的进一步理解。