[发明专利]进行核酸稳定和分离的方法在审
申请号: | 201780068999.5 | 申请日: | 2017-11-08 |
公开(公告)号: | CN110191960A | 公开(公告)日: | 2019-08-30 |
发明(设计)人: | 萨马德·泰勒普尔;耶耶·凯尼 | 申请(专利权)人: | 克维拉公司 |
主分类号: | C12Q1/6806 | 分类号: | C12Q1/6806;C12N1/06;C12N15/10 |
代理公司: | 北京英赛嘉华知识产权代理有限责任公司 11204 | 代理人: | 王达佐;洪欣 |
地址: | 加拿大*** | 国省代码: | 加拿大;CA |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 复合物 核酸 阳离子去污剂 核酸溶液 悬浮物 重悬液 扩增 裂解 表面活性剂 热处理 分离核酸 核酸提取 核酸稳定 离心沉淀 稳定试剂 样品稳定 释放 标志物 转录组 重悬 洗涤 分解 细胞 学生 | ||
1.处理样品以从中释放核酸的方法,所述方法包括:
形成包含所述样品和裂解稳定试剂的混合物,所述裂解稳定试剂包含阳离子去污剂,所述阳离子去污剂能够裂解所述样品中存在的细胞,并与从所述细胞释放的核酸形成复合物,其中所述裂解稳定试剂以足以稳定和防止核酸降解的量提供;
从所述混合物分离所述复合物;
将所分离的复合物重悬于水溶液中,从而获得包含所述分离的复合物的水悬浮物;以及
将所述水悬浮物加热至50摄氏度以上的温度,其持续的时间适合离解所述复合物,从而从中释放所述核酸。
2.如权利要求1所述的方法,其中所述水悬浮物被加热至至少70摄氏度以上。
3.如权利要求1所述的方法,其中所述水悬浮物被加热至至少80摄氏度以上。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法,其中所述水悬浮物被加热至少1分钟。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法,其中通过向所述水悬浮物施加电流的焦耳加热,使所述水悬浮物加热。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法,其中所述样品为包含血液的样品。
7.如权利要求1-5中任一项所述的方法,其中所述样品为全血样品。
8.如权利要求7所述的方法,其中所述全血样品被直接采集至包含所述裂解稳定试剂的血液采集管。
9.如权利要求8所述的方法,其中所述血液采集管为PAXgene(TM)管。
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法,其中所述复合物通过以下方式离心分离:
将所述混合物离心并沉淀所述复合物,从而获得沉淀的复合物;
将所述沉淀的复合物离心洗涤一次或多次。
11.如权利要求1-9中任一项所述的方法,其中通过过滤来分离所述复合物。
12.如权利要求7-9中任一项所述的方法,其中所述复合物通过以下方式离心分离:
将所述混合物离心并沉淀所述复合物,从而获得沉淀的复合物;
将所述沉淀的复合物离心洗涤两次或更多次。
13.对样品进行分子测定以检测从中释放的核酸的方法,所述方法包括:
a)形成包含所述样品和裂解稳定试剂的混合物,所述裂解稳定试剂包含阳离子去污剂,所述阳离子去污剂能够裂解所述样品中存在的细胞,并与从所述细胞释放的核酸形成复合物,其中所述裂解稳定试剂以足以稳定和防止核酸降解的量提供;
b)从所述混合物分离所述复合物;
c)将所分离的复合物重悬于水溶液中,从而获得包含所述分离的复合物的水悬浮物;
d)将所述水悬浮物加热至50摄氏度以上的温度,其持续的时间适合离解所述复合物,从而形成包含从所述复合物释放的核酸的核酸溶液;以及
e)进行测定以检测所述核酸溶液中存在的核酸,其中所述测定在无核酸提取的情况下进行。
14.如权利要求13所述的方法,其中所述测定为通过将至少一部分的所述核酸溶液与包含被配置为能检测生物标志物的引物集的测定试剂接触来进行的生物标志物测定。
15.如权利要求14所述的方法,其中所述生物标志物为信使RNA生物标志物。
16.如权利要求15所述的方法,其中所述信使RNA生物标志物与包含内含子的至少一部分的基因组区域有关。
17.如权利要求14所述的方法,其中所述生物标志物与宿主对感染的反应有关。
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