[发明专利]用于检测样品中微生物的方法

权利要求书

1.用于检测样品中至少一种特定微生物的方法，其中至少一种探针核酸序列能够与所述微生物的至少一种靶核酸序列杂交，所述探针核酸序列包含至少一种能够发射至少一种可检测信号的可检测标记，其中当探针序列未与靶序列结合时，可检测信号取第一值，当探针序列与靶序列结合时，可检测信号取第二值，其中与可检测信号的第一值相比，可检测信号的第二值减小、增加或改变，所述方法包括：

a)提供怀疑为包含微生物的样品；

b)穿孔或裂解样品内的微生物；

c)在允许探针序列与靶序列体外杂交的条件下将探针核酸序列添加到样品中；

d)在一个或多个时间点测量样品中探针核酸序列的可检测信号的至少一个值；以及

e)分析探针核酸序列的可检测信号的测量值，其中如果测量值对应于可检测信号的第二值，则表明样品含有微生物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述条件，其允许探针序列与靶序列的体外杂交，包括将样品的温度至少暂时升高至高于室温的预定温度。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，步骤d)中样品中的可检测信号的值的测量，和步骤e)中测量值的分析都可以连续完成，其中一旦步骤e)中的分析表明样品含有微生物，就可以停止测量。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，至少步骤d)和e)自动进行，并且测量值以电子方式读出并以数字方式处理。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，在步骤c)之后，在预定的时间段内将温度保持恒定。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，在温度保持恒定的同时测量样品中可检测信号的至少一个值。

7.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，在步骤c)之后，冷却样品。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，在冷却期间和/或冷却之后测量样品中可检测信号的至少一个值。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中，探针核酸序列是线性核酸或分子导标。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中，靶核酸序列是DNA序列或RNA序列，特别是rRNA序列。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中，在步骤c)中额外地将至少一种第一对照核酸序列添加至样品，在步骤d)中测量第一对照核酸序列的可检测信号的至少一个值，以及其中步骤e)中的分析包括探针核酸序列的可检测信号的测量值与第一对照核酸序列的可检测信号的测量值的比较，其中如果针对探针核酸序列测量的值不同于针对第一对照核酸序列测量的值，并且所比较的值之间的差异超过预定阈值，则表明样品含有微生物。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，第一对照核酸序列是不与任何核酸序列结合的序列。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中，在步骤c)中向样品中另外添加至少一种与所有微生物的核酸序列结合的第二对照核酸序列。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中，可检测标记是发光标记，特别是荧光标记，或其中可检测标记是报告酶，优选地选自由酪氨酸酶、过氧化物酶、亚硫酸盐氧化酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、鸟嘌呤氧化酶组成的组。

15.用于检测样品中至少一种特定微生物的组合物，所述组合物包括：

a)至少一种穿孔或裂解试剂，用于穿孔或裂解微生物；

b)至少一种探针核酸序列，其能够与所述微生物的至少一种靶核酸序列杂交，所述探针核酸序列包括至少一种能够发射至少一种可检测信号的可检测标记，其中当探针序列未与靶序列结合时，可检测信号取第一值，当探针序列与靶序列结合时，可检测信号取第二值，其中可检测信号的第二值与可检测信号的第一值相比降低、增加或改变；以及

c)至少一种缓冲液和/或增强剂物质，用于调节允许探针序列与靶序列进行体外杂交的条件。