[发明专利]制备免疫球蛋白组合物的方法

说明书

本发明描述了一种从血浆来源的免疫球蛋白级分制备可药用免疫球蛋白组合物的方法，所述方法允许平行地制备富含IgG、IgM和IgA的免疫球蛋白组合物。在这种方法中，将Cohn级分I/II/III或Kistler Nitschmann级分A+I中包含的免疫球蛋白以至少1mS/cm的电导率重新溶解，并在除去污染蛋白质后对所述重新溶解的免疫球蛋白进行阴离子交换层析，以获得富含IgG和富含IgM/IgA的免疫球蛋白组合物。将所述富含IgG的免疫球蛋白组合物用阳离子交换材料进行进一步处理，以获得备解素含量降低的免疫球蛋白组合物。

本发明涉及从人类血浆制备富含IgG的免疫球蛋白组合物和任选地富含IgM和/或IgA的免疫球蛋白组合物的方法，降低含备解素的IgG组合物中的备解素含量的方法，以及富含IgG的药物免疫球蛋白组合物。

从人类血浆制备并适用于医疗用途的免疫球蛋白组合物在本领域中是已知的，并且几十年来在广范围的疾病的治疗中发挥重要作用。免疫球蛋白被用于例如在人类中治疗感染，并且可以被分为具有各种不同的生物化学和生理学性质的各种不同类别。例如，IgG参与对抗病毒抗原的防御，而IgM主要在抗细菌和抗毒素免疫应答中有活性，因此被用于细菌感染的预防或治疗。因此，商品化免疫球蛋白组合物包含各种不同百分率的IgG、IgA和IgM，其中不同制剂具有不同的治疗应用。当前，(Biotest AG,Dreieich,Germany)是市场上可商购的唯一含有IgM的免疫球蛋白组合物。

用于医疗用途的免疫球蛋白组合物通常从血浆或血清的级分制备，所述级分通过经典的Cohn血浆分级方法或其公知的改良方法例如Cohn/Oncley和Kistler/Nitschmann获得。然后对这些级分进行大量纯化步骤，以除去污染物包括病毒、变性蛋白质、蛋白酶和脂质。用于分级的人类血浆从数千供体收集，并且尽管对源血浆进行了全面测试，但仍可能含有致病性病毒。因此，为了获得用于医疗用途的安全产品，失活或除去病毒的过程步骤是重要的。几种用于病毒失活/去除的技术在本领域中是已知的，例如化学或热处理、用UVC光照射或纳滤，进行它们是为了确保总体病毒安全性。

除了可能存在的病毒之外，除去其他污染物如蛋白水解酶类、血管活性物质例如激肽释放酶原活化剂、蛋白质聚集体和变性的免疫球蛋白，对于获得良好耐受的产品也是重要的。变性的免疫球蛋白和免疫球蛋白聚集体对患者来说是潜在的风险，因为它们具有高的非特异性激活补体的能力，在接受这些变性的免疫球蛋白的患者中引起严重副作用。免疫球蛋白组合物非特异性激活补体系统的能力与它的抗补体活性(ACA)相关，所述抗补体活性是蛋白质组合物在补体测定法中消耗补体的能力，并且可以通过标准化测试方法来测量，例如在《欧洲药典》(European Pharmacopoeia)8.0(2.6.17–用于免疫球蛋白的抗补体活性的测试)中所描述的方法，按照所述测试方法，ACA的容许限值为1CH50/mg蛋白质。

除去所有这些污染物，对于(1)产品在静脉内给药后被患者耐受，(2)确保产品符合关于病毒污染的生物安全准则，(3)使得产品在长期储存期间稳定，和(4)产生所需的化合物混合物/药物组合物，是重要的。

用于生产富含IgG、IgM和/或IgA的免疫球蛋白组合物的方法，在现有技术中已被公开。

EP 0 447 585 A1描述了静脉内可耐受的多克隆IgG溶液的生产，所述溶液应该不含聚集体、血管活性物质和蛋白水解活性。从Cohn级分II或II/III开始并在用辛酸处理以沉淀污染蛋白质后，对获得的溶液进行阳离子交换层析，以除去可能以高达5％的量存在于Cohn级分II或II/III中的IgG聚集体。阳离子交换层析可以在IgG被结合到阳离子交换材料或处于穿流模式的条件下进行。

EP 0 825 998 A描述了从Cohn级分II或上清液级分III开始生产可药用IgG制剂。为了消除抗补体活性并失活病毒，将所述级分用胃蛋白酶处理并进行溶剂/去污剂处理。用于病毒失活的化学品和胃蛋白酶通过用阳离子交换剂处理来去除。