[发明专利]多重PCR检测柯萨奇病毒、肠道病毒71型和肠道病毒通用型用引物探针组

说明书

本公开涉及一种多重PCR检测柯萨奇病毒A6型/A10型/A16型/肠道病毒71型/肠道病毒通用型用引物探针组。本公开还提供了一种多重荧光定量PCR检测柯萨奇病毒A6型/A10型/A16型/肠道病毒71型/肠道病毒通用型的试剂盒，所述试剂盒包括本公开所述的引物探针组。通过上述技术方案本公开为食品中柯萨奇病毒A6型、A10型、A16型、肠道病毒71型及肠道病毒通用型的快速筛查提供了完备的解决方案，能够进一步提升手足口病的应急处置和综合防控能力，为降低手足口病在人群大范围传播提供必要的技术保障，进而消除传染病暴发造成的社会影响和经济损失。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及多重PCR检测检测柯萨奇病毒A6型/A10型/A16型/肠道病毒71型/肠道病毒通用型用引物探针组。

背景技术

手足口病相关病毒的检测方法包括病毒分离培养、血清学检查和病毒核酸检测三个方面。前两种方法操作繁琐，鉴定周期长，且抗血清容易和其它人类肠道病毒产生交叉反应。分子生物学方法鉴定人类肠道病毒分型的方法越来越多地被应用，目前现有的手足口病的体外诊断试剂盒包括实时荧光PCR方法、等温扩增PCR方法、液相芯片技术等。以荧光标记探针为基础的实时荧光PCR技术目前在手足口临床诊断中应用最为广泛，可准确快速的对待测样品进行定性的检测。根据检测病原数目，还可以分为单重或多重实时荧光PCR技术，反应体系中包括一对或多对特异性PCR引物及探针。

现有的手足口病原检测试剂盒的检测鉴定技术检测目标单一或只针对常见柯萨奇病毒A16型、肠道病毒71型的联检，难以满足手足口病病毒分型多样性的流行病学发展需求。目前还没有针对柯萨奇病毒A6型、A10型、A16型、肠道病毒71型及肠道病毒通用型采用多重实时荧光PCR同时鉴定病毒分型的报道。

发明内容

本发明的目的是解决多种血清型肠道病毒同时检测与鉴定的问题，提供一种柯萨奇病毒A6型/A10型/A16型/肠道病毒71型/肠道病毒通用型的荧光定量PCR引物探针组和试剂盒，同时检测肠道病毒病并准确鉴定4种肠道病毒血清型，建立一种基于荧光定量PCR平台的多重PCR检测方法。

为达到以上目的，本发明提供一多重PCR检测柯萨奇病毒A6型/A10型/A16型/肠道病毒71型/肠道病毒通用型用引物探针组，其中，包括组分A和组分B，

其中，所述组分A包括：

SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的柯萨奇病毒A6型上游引物，

SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的柯萨奇病毒A6型下游引物，

具有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的柯萨奇病毒A6型探针，所述柯萨奇病毒A6型探针的5’端标记有CY5发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ3；

SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的柯萨奇病毒A10型上游引物，

SEQ ID NO.5所示核苷酸序列的柯萨奇病毒A10型下游引物，

具有SEQ ID NO.6所示核苷酸序列的柯萨奇病毒A10型探针，所述柯萨奇病毒A10型探针的5’端标记有VIC发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1；

SEQ ID NO.7所示核苷酸序列的柯萨奇病毒A16型上游引物，

SEQ ID NO.8所示核苷酸序列的柯萨奇病毒A16型下游引物，

具有SEQ ID NO.9所示核苷酸序列的柯萨奇病毒A16型探针，所述柯萨奇病毒A16型探针的5’端标记有FAM发光基团，3’端标记有荧光淬灭基团BHQ1；

所述组分B包括：

SEQ ID NO.10所示核苷酸序列的肠道病毒71型上游引物，