[发明专利]一种乳酸菌的筛选方法

说明书

本发明涉及微生物筛选技术领域，具体为一种乳酸菌的筛选方法。本发明方法包括：先将样品进行研磨处理，然后进行扩大培养；之后用倾注法使其在培养基上进行生长以便分出乳酸菌单菌落；将单菌落点菌接于有指示菌的MRS平板上，并用MRS软琼脂进行覆盖；挑选出有抑菌效果的菌株进行单菌落纯化及保存；最后再进行验证。用该方法分离筛选出来的菌株不仅可以减少前期其它杂菌的影响，同时也可以排除无抑菌效果的乳酸菌，这样不仅可以减少工作量同时也可以更加针对性的筛选出所需抑制病原菌的菌株。

技术领域

本发明属于微生物筛选技术领域，具体涉及一种乳酸菌的筛选方法。

背景技术

近年来，随着我国经济的不断发展，人们的饮食结构发生了很大的改变，合理饮食、营养均衡成为了人们主要的关心因素。水产动物品种多样，是营养物质含量非常均衡的一类食物，它们不仅含有人体易于吸收的丰富蛋白，而且脂肪含量低，同时还具有人体所需的各种维生素和矿物质，深得广大人们的喜爱，所以近些年我国水产行业发展非常迅猛。为得到高产，人们把水产养殖业逐渐向高密度、高度集约化方向发展，但这就面临着水体富营养化，水生环境复杂，从而导致了病害的日趋严重。抗生素对水产致病菌具有极好的疗效，同时也伴随着菌株耐药性等问题的日趋凸显，所以用绿色无污染的物质替代抗生素成为了热门话题。

乳酸菌是一类利用发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的通称。乳酸菌在生长过程中会代谢产生有机酸、细菌素、特殊酶类及过氧化氢等物质，这些代谢产物可杀死或抑制病原菌的生长，此种方法不会使细菌产生耐药性，因此被人们认为是可替代抗生素的一类天然无污染的菌株。

目前有许多科研工作者从事乳酸菌的筛选工作，但目前的筛选方法多为先大批量筛选，然后测理化性质，初步确定为乳酸菌后进行16s测序，确定其菌种名称，然后在进行抑菌实验，在此过程中大批量的筛选就已经很耗费工作量，而之后进行的理化性质确定不仅耗时耗力，同时也是一种成本的浪费。

发明内容

鉴于此，有必要针对上述问题提供一种对致病菌有抑制作用的乳酸菌的筛选方法，其中该方法可以减少由非乳酸菌以及无抑菌效果的乳酸菌所带来的工作量，增加有抑菌效果的乳酸菌的识别量。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种乳酸菌的筛选方法，包括步骤：

1)取样本，研磨至粉碎后，加入到MRS肉汤中，静置培养；

2)取步骤1)培养所得的菌液稀释后，与带指示剂的MRS培养基混匀，冷凝后，培养；

3)制备指示菌液；

4)挑取步骤2)中培养所得的单菌落，点菌于MRS平板上，倾倒步骤3)制得的指示菌液，冷凝后，恒温培养；

5)点取步骤4)中培养得到的有明显抑菌圈的菌株，接种于另一新的带有指示剂的MRS平板中，培养；

6)挑取步骤5)培养得到的单菌落划线于MRS平板上，培养后；再挑取所得单菌落于MRS肉汤中培养，保藏待用。

进一步的，所述筛选方法还包括步骤7)：验证步骤6)中培养后的菌株是否存在抑菌效果。

进一步的，所述步骤1)中，样品先用生理盐水研磨(玻璃匀浆器)，然后将处理后的样品加入到MRS肉汤中，样品占MRS肉汤体积的10％左右，可用15ml离心管，静置培养8-10h。

进一步的，所述步骤2)中所用MRS培养基带有的指示剂为1-2％溴甲酚紫溶液，30℃或37℃恒温培养16-18h。