[发明专利]一种乳酸菌的筛选方法

权利要求书

1.一种乳酸菌的筛选方法，包括步骤：

1)取样本，粉碎后，加入到MRS肉汤中，静置培养；

2)取步骤1)培养所得的菌液稀释后，与带指示剂的MRS培养基混匀，冷凝后，培养；

3)制备指示菌液；

4)挑取步骤2)中的单菌落，点菌于MRS平板上，倾倒步骤3)制得的指示菌液，冷凝后，培养；

5)点取步骤4)中培养得到的有明显抑菌圈的菌株，接种于带有指示剂的MRS平板中，培养；

6)挑取步骤5)培养得到的单菌落划线于MRS平板上，培养后；再挑取所得单菌落于MRS肉汤中培养，即得。

2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法还包括步骤7)：验证步骤6)中培养后的菌株的抑菌效果。

3.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤7)中使用滤纸片法或牛津杯法进行进一步验证。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤1)中，样品先用生理盐水研磨，然后将处理后的样品加入MRS肉汤中，样品占MRS肉汤体积的10％，静置培养8-10h。

5.根据权利要求1-3任意一项所述的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法步骤2)和步骤5)中所用MRS培养基带有的指示剂为1-2％溴甲酚紫溶液；培养条件为：30℃或37℃培养16-18h。

6.根据权利要求1-3任意一项所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤3)中指示菌的制备方法包括：将指示菌三区划线，过夜培养；挑取单菌落于TSB肉汤中，180rpm 37℃ 8-10h；再1-3％接种量转接于TSB肉汤中培养8-10h至对数中期，测其OD₅₉₅值，将菌液OD₅₉₅值稀释至1.0；取1ml加入到已灭菌冷却至50℃的TSB培养基中混匀。

7.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤3)中使用的指示菌为反复活化后生长至对数中后期的菌株。

8.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法步骤3)中所用TSB培养基为软琼脂培养基，琼脂含量为0.7％。

9.根据权利要求1-3任意一项所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤4)中点菌于MRS平板上后静置1-2h，再倾倒步骤3)的指示菌液，冷凝后，倒置培养于30℃或37℃培养箱中，培养16-18h。

10.根据权利要求1-3任意一项所述的筛选方法，其特征在于，步骤6)中培养后的菌落采用20％甘油管-80℃保藏。