[发明专利]一种快速鉴定杂交水稻种子纯度的方法

说明书

本发明提供了一种快速鉴定杂交水稻种子纯度的方法。本发明的方法包括：(1)供试水稻种子培育成幼苗，提取幼苗基因组DNA；(2)取符合统计学要求数量的供试水稻幼苗的基因组DNA作为模板，以SEQ ID NO.1‑48所述的引物进行PCR扩增；(3)电泳观察扩增产物，真正的杂交F1带具有双亲互补的带型，有两条带；而混杂的亲本和其他常规稻种子为单带；杂交水稻种子纯度(％)＝(供试幼苗数‑异品种幼苗数)÷供试幼苗数×100％。本发明方法可大规模应用，且操作简便，整个过程在实验室内完成，完全不占用土地资源，节约土地和成本，鉴定结果准确可靠、筛选效果明显。本发明方法可在推广应用，市场价值显著。

技术领域

本发明涉及杂交水稻种子纯度鉴定领域，尤其涉及一种快速鉴定杂交水稻种子纯度的方法。

背景技术

杂交水稻的推广对大幅度提高我国的粮食产量起了巨大的推动作用。但由于种子纯度问题给农户造成严重减产的事件也常有发生。我国目前鉴定种子纯度的常规方法是田间种植鉴定，往往需要3-4个月的时间。一方面由于环境条件的影响，可能影响纯度鉴定的准确性；另一方面，由于田间鉴定需要时间长，妨碍了种子的销售，有的作物当年的种子要等到第二年才能销售。建立一套准确、快速、稳定、简单的杂交水稻种子纯度鉴定方法，对于我国杂交水稻的推广应用具有重大意义。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明提供一种快速鉴定杂交水稻种子纯度的方法。

本发明提供的一种快速鉴定杂交水稻种子纯度的方法，包括以下步骤：

(1)提取供试水稻种子基因组DNA或供试水稻种子培育成幼苗后提取幼苗基因组DNA；

(2)引物筛选：以SEQ ID NO.1～48所述的24对引物进行筛选，找出供试水稻种子双亲互补的带型清晰的多态性引物；

(3)纯度鉴定：取符合统计学要求数量的供试水稻种子或幼苗的基因组DNA作为模板，以(2)筛选得到的带型清晰的多态性引物分别进行PCR扩增；

(4)扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察并统计结果：真正的杂交F1带具有双亲互补的带型，是双带；而混杂的亲本和其他常规稻种子为单带；杂交水稻种子纯度(％)＝(供试幼苗数-异品种幼苗数)÷供试幼苗数×100％；所述异品种苗数即供试水稻种子中混杂的与双亲互补的带型不同带型的苗数。

本发明的方法中，步骤(1)提取DNA的方法不需要用液氮研磨、以及氯仿抽提、离心纯化和DNA沉淀的步骤。

本发明的方法中，步骤(1)提取DNA的方法可参考中国专利CN105002163A的提取DNA的方法进行。步骤(1)提取水稻幼苗DNA的方法为在水稻幼苗中加入氢氧化钠水溶液，沸水中煮20s～40s后加入盐酸水溶液和缓冲溶液，继续在沸水中煮1～3min，得到水稻DNA样品；所述缓冲溶液包括Tris溶液和IGEPAL-630溶液；所述氢氧化钠水溶液、盐酸水溶液和缓冲溶液的体积比为2:2:1。

24对引物是发明人从我国生产上推广的500个杂交稻组合中筛选得到的可用于杂交水稻品种鉴定的24对特异性引物，见表1。

表1用于纯度鉴定的24对SSR多态性引物

其中，步骤(2)符合统计学要求数量为96的n倍，n为大于1的整数。