[发明专利]一种快速鉴定杂交水稻种子纯度的方法

权利要求书

1.一种快速鉴定杂交水稻种子纯度的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)提取供试水稻种子基因组DNA或供试水稻种子培育成幼苗后提取幼苗基因组DNA；

(2)引物筛选：以SEQ ID NO.1～48所述的24对引物进行筛选，找出供试水稻种子双亲互补的带型清晰的多态性引物；

(3)纯度鉴定：取符合统计学要求数量的供试水稻种子或幼苗的基因组DNA作为模板，以(2)筛选得到的带型清晰的多态性引物分别进行PCR扩增；

(4)扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察并统计结果：真正的杂交F1带具有双亲互补的带型，是双带；而混杂的亲本和其他常规稻种子为单带；杂交水稻种子纯度(％)＝(供试幼苗数-异品种幼苗数)÷供试幼苗数×100％；所述异品种苗数即供试水稻种子中混杂的与双亲互补的带型不同带型的苗数。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)提取DNA的方法不需要用液氮研磨、以及氯仿抽提、离心纯化和DNA沉淀的步骤。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)提取水稻幼苗DNA的方法为在水稻幼苗中加入氢氧化钠水溶液，沸水中煮20s～40s后加入盐酸水溶液和缓冲溶液，继续在沸水中煮1～3min，得到水稻DNA样品；所述缓冲溶液包括Tris溶液和IGEPAL-630溶液；所述氢氧化钠水溶液、盐酸水溶液和缓冲溶液的体积比为2:2:1。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)符合统计学要求数量为96的n倍，n为大于1的整数。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)PCR扩增体系为，总体系为10μl时，10×buffer 1μl，2mM的dNTP0.5μl，5U/μl的Taq gold 0.04μl，模板DNA 1μl，上下游引物各0.1μl，H₂O 7.26μl。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)PCR扩增方法为，94℃预变性4分钟；94℃变性15秒，55℃结合15秒，72℃延伸30秒，扩增35个循环；72℃延伸5分钟。

7.如权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于，步骤(2)PCR扩增可根据待鉴定杂交水稻父本和母本的品种针对性地选择具有双亲互补带型的引物进行PCR。

8.权利要求1-7任一所述的方法在杂交水稻种子质量检测中的应用。