[发明专利]梨果实不同发育时期荧光定量内参基因的筛选及应用

权利要求书

1.梨果实不同发育时期荧光定量内参基因，其特征在于：包含以下（1）~（3）中的至少一种：

（1）翠冠梨果实不同发育时期荧光定量内参基因为Pbr028511，该内参基因Pbr028511的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

（2）丰水梨果实不同发育时期荧光定量内参基因为Pbr038418，该内参基因Pbr038418的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

（3）雪青梨果实不同发育时期荧光定量内参基因为Pbr041114，该内参基因Pbr041114的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

2.权利要求1所述梨果实不同发育时期荧光定量内参基因的特异性引物，其特征在于：

（1）所述Pbr028511基因的特异性引物如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示；

（2）所述Pbr038418基因的特异性引物如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示；

（3）所述Pbr041114基因的特异性引物如SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示。

3.权利要求1所述的内参基因或权利要求2所述的特异性引物在制备荧光定量试剂盒中的应用。

4.一种梨果实不同发育时期荧光定量试剂盒，其特征在于包含权利要求2所述特异性引物中的至少一种。

5.根据权利要求4所述的梨果实不同发育时期荧光定量试剂盒，其特征在于：该试剂盒中还包含PCR技术常用试剂。

6.基因Pbr028511、Pbr038418和Pbr041114中的至少一种作为梨果实不同发育时期荧光定量内参基因的应用，基因Pbr028511的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；基因Pbr038418的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；基因Pbr041114的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：

（1）所述的基因Pbr028511作为翠冠梨果实不同发育时期荧光定量内参基因；

（2）所述的基因Pbr038418作为丰水梨果实不同发育时期荧光定量内参基因；

（3）所述的基因Pbr041114作为雪青梨果实不同发育时期荧光定量内参基因。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于：

（1）所述Pbr028511基因的特异性引物如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示；

（2）所述Pbr038418基因的特异性引物如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示；

（3）所述Pbr041114基因的特异性引物如SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示。

9.权利要求1所述的内参基因Pbr028511、Pbr038418和Pbr041114或权利要求4所述的试剂盒在相对定量法实时荧光定量PCR中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：在翠冠梨、丰水梨和雪青梨果实不同发育时期功能基因表达试验中采用所述的内参基因定量，所述基因在相对定量法实时荧光定量PCR中作为内参基因使用。