[发明专利]乳制品中粘红酵母的检测探针、基因芯片和方法

说明书

技术领域

本发明属于食品安全领域，具体为一种乳制品中粘红酵母的检测探针及基因芯片和方法，将基因芯片技术应用于乳品污染微生物的分类鉴定。

背景技术

乳制品是一种营养丰富，容易被消化和吸收的天然食品，随着人们生活水平的提高，已经成为生活中常见的食品。但是营养丰富的乳制品也是各种微生物青睐的温床，这导致乳制品的货架期非常有限，比如经巴氏灭菌的乳制品保质期一般不超过7天（巴氏鲜奶占全球液态奶70%的市场份额），近些年市场占有量越来越大的发酵酸奶，其保质期一般也只有21天。

另一方面，国家《食品安全法》和《企业生产乳制品许可条件审查细则（2010版）》中明确要求企业必须对所生产、加工的乳制品进行出厂前微生物检验，包括5种指示菌和5种致病菌的检测。目前乳制品企业基本都是采用传统的平板培养法来检测微生物，这种方法的检测周期一般在3~4天左右，甚至有些致病菌不能仅凭菌落形态来判定，需要配合其他生化反应试验做进一步鉴定，这无疑又增加了检测周期。因此，较长的检测周期（完成国标要求检测的10种微生物需要5~6天）和较短乳制品保质期（营养物质没有被破坏的巴氏灭菌乳制品的货架期只有7天）之间形成了矛盾，这一矛盾已成为制约乳制品企业发展的重要瓶颈，也成为制约市场终端能获取到营养最全面乳制品的重要因素。

基因芯片是DNA识别技术的一种体现，利用芯片高通量的优势，可以在一张芯片上同时对多个物种的多个DNA条形码进行检测，不仅极大地提高了鉴定的准确性，而且还大大缩短了检测周期，即利用基因芯片可以在短时间内对微生物多个DNA靶点进行检测。

发明内容

本发明目的是提供一种乳制品中真菌粘红酵母DNA检测芯片的制备方法，通过该基因芯片能够在短时间内对粘红酵母的两个DNA片段进行定性定量检测。本发明内容涉及乳制品中微生物核酸提取、PCR引物设计及扩增、基因芯片的制备及杂交检测。

本发明是采用如下技术方案实现的：

本发明技术方案之一为，乳制品中粘红酵母的检测探针，包括：

粘红酵母ITS的检测探针：

5’NH₃—TTTTTTTTTTTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCGAGAGCC—3’；

粘红酵母tubB的检测探针：

5’NH₃—TTTTTTTTTTTTCAGCGTGTCGCACGCCTCGGTCTCGTG—3’。

本发明技术方案之二为，乳制品中粘红酵母的检测基因芯片，包括如上所述的2个检测探针。

本发明技术方案之三为，乳制品中粘红酵母的检测方法，包括如下步骤：

（1）、靶序列的确定：

真菌粘红酵母的特异性检测靶序列分别为：

粘红酵母ITS：

AAGGATCATTAGTGAATCTAGGACGTCCAACTTAACTTGGAGTCCGAACTCTCACTTTCTAACCCTGTGCATCTGTTAATTGGACTAGTAGCTCTTCGGAGTGAACCGCCATTCACTTATAAACACAAAGTCTATGAATGTATACAAATTTATAACAAAACAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACCTTGCGCTCCTTGGTATTCCGAGGAGCATGCCTGTTTGAGTGTCATGAAATCTTCAACCCACCTCTTTCTTAGTGAATCTGGTGGTGCTTGGTTTCTGAGCGCTGCTCTGCTTCGGCTTAGCTCGTTCGTAATGCATTAGCATCCGCAACCGAACTTCGGATTGACTTGGCGTAATAGACTATTCGCTGAGGATTCTAGTTTACTAGAGCCGAGTTGGGTTAAAGGAAGCTCCTAATCCTAAAGTCTATTTTTTTGATTAGATCTCAAATCAGGTAGGACTACCCGCTGAACTTAA；

粘红酵母tubB：