[发明专利]筛选与少根浮萍根生长相关的分子标记的方法

说明书

本发明公开了一种筛选与少根浮萍根生长相关的分子标记的方法。本发明公开了一种筛选少根紫萍根生长相关的分子标记的方法，包括克隆体培养、基因组DNA提取、设计微卫星引物、PCR扩增和数据统计与分析。有益效果为：本发明可快速得到大量的经微卫星引物标记的少根紫萍的DNA序列，微卫星标记检测速度快，可快速获得少根紫萍Sp16、Sp51及Sp53遗传标记基因座呈现高度遗传变异的多态性图谱。少根紫萍总根长/片和平均根长/片与Sp16、Sp51及Sp53显著相关（P0.001）。了解基因型差异对紫萍生长以及污染物净化能力的影响，提高废水的生物治理效率。

技术领域

本发明涉及DNA分子标记技术领域，具体是一种筛选少根紫萍根生长相关的分子标记的方法。

背景技术

富、高度杂合且稳定性好、遵循孟德尔分离定律共显性遗传、易于PCR扩增等特点，已成为近年来广泛应用的DNA标记，常应用于生物资源的家系谱系认证、基因连锁分析、遗传图谱构建、种质鉴定、种群遗传多样性等许多研究领域。

在自然环境中，少根紫萍基本以无性生殖进行繁殖，当环境条件适宜时2天即可克隆出一代，种群遗传多样性水平较低。

现有技术提供多种卫星标记的检测方法，例如，中国发明授权专利文献 一种锈斑蟳微卫星标记的快速检测方法 授权公告号 CN 103305611 B该发明涉及一种锈斑蟳微卫星标记的快速检测方法，包括 ： （1）锈斑蟳基因组 DNA 的提取 ； （2）根据 GeneBank 数据库中锈斑蟳的功能基因序列，获得含有微卫星重复的基因序列 ； （3）微卫星标记引物的设计 ； （4）锈斑蟳不同个体的基因组 DNA的 PCR 扩增 ； （5）PCR 产物的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。该发明的检测方法具有快速、准确、灵敏等优点，能够直观地检测出锈斑蟳不同个体的基因型，从而快速获得锈斑蟳在功能基因微卫星位点遗传变异的多态性图谱，该微卫星标记可应用于锈斑蟳遗传变异与种群遗传多样性分析等领域，但微卫星标记检测速度还有提升空间。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速筛选与少根紫萍根生长相关的分子标记方法，清晰少根紫萍的根数/片、总根长/片和平均根长/片与相关DNA位点的关系。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：筛选少根紫萍根生长相关的分子标记的方法，包括克隆体培养、基因组DNA提取、设计微卫星引物、PCR扩增和数据统计与分析。

作为优选，植株克隆体培养的营养液成份及其浓度为：氮0.3~0.4g/L、磷酐0.1~0.15 g/L、氧化钾0.16~0.23 g/L、氧化镁0.01~0.015 g/L和硫0.012~0.02 g/L。上述营养液能全面提供少根紫萍生长所需的大量元素和微量元素，无性繁殖速度快，基因突变的概率低，可得到大量基因相同的植株，样本量足。

作为优选，植株克隆体在光照培养箱中进行室内培养50~70d，培养条件为22.5~23.5℃，湿度73~83%，光照强度为1800~2200lux，光暗时间14~16:10~8h。上述培养条件下，少根紫萍的光合作用强，生长速度快。

作为优选，微卫星引物为Sp16：F: GGATCTGTATATGCCCTCTCT；R:GCCGCTATCTCAGGTCTTGCT ；Sp51：F: CTCGCACATCAGTTCACAGGA；R:TCAGACATCTGGCGCAGTAGA； Sp53：F: AGGACGACGACCTCTACTGCC；R:TACGAGTTCTGCGGACCATCA。