[发明专利]筛选与少根浮萍根生长相关的分子标记的方法

权利要求书

1.筛选与少根紫萍根生长相关的分子标记的方法，包括克隆体培养、基因组DNA提取、设计微卫星引物、PCR扩增和数据统计与分析；所述的微卫星引物为：Sp16：F:GGATCTGTATATGCCCTCTCT；R:GCCGCTATCTCAGGTCTTGCT；Sp51：F:CTCGCACATCAGTTCACAGGA；R:TCAGACATCTGGCGCAGTAGA；Sp53：F:AGGACGACGACCTCTACTGCC；R:TACGAGTTCTGCGGACCATCA。

2.根据权利要求1所述的筛选与少根紫萍根生长相关的分子标记的方法，其特征在于：所述的植株克隆体培养的营养液成份及其浓度为：氮0.3~0.4g/L、磷酐0.1~0.15g/L、氧化钾0.16~0.23g/L、氧化镁0.01~0.015g/L和硫0.012~0.02g/L。

3.根据权利要求1所述的筛选与少根紫萍根生长相关的分子标记的方法，其特征在于：所述的植株克隆体在光照培养箱中进行室内培养50~70d，培养条件为22.5~23.5℃，湿度73~83%，光照强度为1800~2200lux，光暗时间14~16:10~8h。

4. 根据权利要求1所述的筛选与少根紫萍根生长相关的分子标记的方法，其特征在于：所述的PCR扩增体系为18~22μl，其中包括3.4~4.2U TaqDNA聚合酶、1.6~2.2μl 10×PCRbuffer、0.7~0.9mM dNTP、上游、下游引物各0.3mM、50~100ng DNA模板，ddH₂O补至终体积20μl；在PCR扩增仪上进行扩增，扩增程序为92~96℃预变性4.5~5.6min；93~96℃变性28~33s，52~56℃复性33~37s，70~75℃延伸36~43s，共33~38个循环；最终70~75℃延伸2.5~3.4min。

5. 根据权利要求1所述的筛选与少根紫萍根生长相关的分子标记的方法，其特征在于：所述的数据统计与分析为对紫萍克隆的根数/片、总根长/片和平均根长/片进行统计描述，应用单因素方差分析和最小显著差数法或Dunnett T3非参数多重比较两两基因型生长性状特征之间的差异性；应用一般线性模型过程对根数/片、总根长/片和平均根长/片性状与微卫星位点的关联性进行最小二乘分析,并对同一位点的各基因型进行多重比较。