[发明专利]无创产前诊断孕妇胎儿三体综合征的试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种无创产前诊断孕妇胎儿三体综合征的试剂盒，其特征在于，主要包括以下组份：

针对21号、18号或13号染色体中的一条或几条设计的上下游引物对PP_三体；针对除21号、18号及13号染色体外的其它常染色体中的任一条设计的上下游引物对PP_常；其中任一对PP_三体与PP_常需满足以下条件：①四条引物两两之间的熔点差值在4^oC以内，②扩增子长度≤150bp，且不产生非目的产物，③两个扩增子的熔点差值在2^oC以上，④两个扩增子的熔解峰明显分离，不形成肩峰；

所述引物对PP_三体与PP_常中任一条引物需满足以下条件：引物长度22±2nt，引物T_m 58±2^oC；

所述引物对PP_三体与PP_常的获得方式为：

（a）针对21号、18号或13号染色体和其它常染色体中的任一条或数条分别设计并合成数对引物；

（b）用怀有正常胎儿的孕妇或未孕健康妇女血清DNA做模板，加上步骤（a）的不同对引物分别配制PCR反应体系并进行单重PCR反应；取PCR产物进行电泳检查PCR产物单一性，选取产物单一的引物留用；

（c）用怀有正常胎儿的孕妇或未孕健康妇女血清DNA做模板，对步骤（b）中筛选到的引物进行单重荧光定量PCR及高分辨率熔解曲线分析，从而获得相应扩增子的熔点，选取21号、18号或13号染色体和其它常染色体扩增子熔点差值在2^oC及以上的组合，作为双重PCR的引物组合；

（d）用怀有正常胎儿的孕妇或未孕健康妇女血清DNA做模板，对步骤（c）中筛选到的引物组合进行双重荧光定量PCR及高分辨率熔解曲线分析，如果HRM结果显示具有与单重PCR产物T_m相对应的两个熔解峰，峰型尖锐，无杂峰、无肩峰，且峰高比值的范围是0.5-2.0，则将这对引物作为可用的引物组；

其中，可用的引物组为：序列表中SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ IDNo.4的组合；SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7和SEQ ID No.8的组合；SEQ IDNo.9、SEQ ID No.10、SEQ ID No.7和SEQ ID No.8的组合；SEQ ID No.11、SEQ ID No.12、SEQ ID No.13和SEQ ID No.14的组合；SEQ ID No.15、SEQ ID No.16、SEQ ID No.17和SEQID No.18的组合。

2.根据权利要求1所述的无创产前诊断孕妇胎儿三体综合征的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包含荧光定量PCR试剂，所述荧光定量PCR试剂包括荧光染料、Taq DNA 聚合酶、反应缓冲液、dNTPs、K⁺溶液或Mg²⁺溶液中的一种或几种。

3.根据权利要求2所述的无创产前诊断孕妇胎儿三体综合征的试剂盒，其特征在于，所述荧光染料选自Eva Green、LC Green或Sybr Green I，所述反应缓冲液为pH8.8的Tris-HCl缓冲液。