[发明专利]一种可抑制NF‑κB蛋白活化的多肽及检测sORF表达的方法

权利要求书

1.一种可抑制NF-κB蛋白活化的多肽，其特征在于，包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

2.权利要求1所述的可抑制NF-κB蛋白活化的多肽的DNA编码片段，其特征在于，包含如SEQ ID NO:2所示核苷酸序列或其同义突变体序列。

3.一种用于检测sORF的DNA构建体系统，其特征在于，包括NF-κB抑制多肽表达构建体和NF-κB调控的报告基因表达载体；

所述NF-κB抑制多肽表达构建体包含启动子和连接于所述启动子下游的权利要求2所述的DNA编码片段并且所述DNA编码片段的3’末端连接有终止密码子；

所述NF-κB调控的报告基因表达构建体包含NF-κB调控的报告基因表达框。

4.根据权利要求3所述的DNA构建体系统，其特征在于，所述NF-κB调控的报告基因表达载体含有NF-κB调控的荧光素酶I表达框，并且DNA构建体系统还包括对照报告基因表达载体，所述对照报告基因表达载体包含不受NF-κB调控的荧光素酶II表达框，并且荧光素酶I和荧光酶II激发产生的荧光波长不同。

5.一种用于检测序列中是否有sORF的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将待检测序列插入权利要求3或4所述的DNA构建体系统中NF-κB抑制多肽表达构建体上，所述待检测序列连接于所述DNA编码片段的5’末端，并且保证从所述待检测序列的第一个ATG开始至所述DNA编码片段之间的核苷酸个数为3的倍数；

S2：将S1得到的含有所述待检测序列的NF-κB抑制多肽表达构建体和所述NF-κB调控的报告基因表达构建体导入于同一个表达宿主中；

S3：检测所述NF-κB调控的报告基因表达框所表达的报告基因的强度，如果NF-κB调控的报告基因的表达强度显著降低，则指示所述待检测序列中的sORF被表达,如果NF-κB调控的报告基因的表达强度没有显著变化，则指示所述待检测序列中的sORF未被表达。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述NF-κB调控的报告基因表达载体含有NF-κB调控的荧光素酶I表达框，并且DNA构建体系统还包括对照报告基因表达载体，所述对照报告基因表达载体包含不受NF-κB调控的荧光素酶II表达框，并且荧光素酶I和荧光酶II激发产生的荧光波长不同。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，待检测序列的NF-κB抑制多肽表达构建体通过将所述待检测序列连接于所述编码DNA片段的5’末端，并插入至质粒pCMV-3Tag-1A的Xho I与Hind III位点之间得到，所述NF-κB调控的报告基因表达载体为pNF-κB Luc，并且对照报告基因表达载体为phRL-TK。

8.根据权利要求6或7中任一项所述的方法，其特征在于，S1具体包括：

S11：将所述细胞培养至贴壁，并恢复形态；

S12：将所述NF-κB抑制多肽表达构建体、所述NF-κB调控的报告基因表达载体和对照报告基因表达载体转染至细胞中。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，S2具体包括：

S21：转染后将细胞继续培养24-36小时，洗涤细胞；

S22：分别检测转染后的细胞中的荧光素酶I和荧光素酶II的活性；

S23：根据荧光素酶II活性归一化荧光素酶I活性得到的值判断所述待检测序列中是否表达，如果所述值显著降低，则指示所述待检测序列中的sORF被表达,如果所述值没有显著变化，则指示所述待检测序列中的sORF未被表达。