[发明专利]核酸扩增的精度管理方法、精度管理用试剂及其试剂盒

说明书

本发明提供包括核酸检测工序和判断工序的核酸扩增的精度管理方法。核酸检测工序包括：调制含目标核酸和精度管理用多核苷酸的核酸样品的工序、调制含上述目标核酸一分子的隔区和含上述精度管理用多核苷酸一分子的隔区的工序、在上述各隔区中进行上述核酸样品中所含的上述目标核酸或上述精度管理用多核苷酸的核酸扩增，使用检测用探针检测上述检测用探针引发的信号的工序。在判断工序中，基于上述信号检测工序的结果，判断上述核酸检测工序适宜或不适宜。

【技术领域】

本发明涉及核酸扩增的精度管理方法、精度管理用试剂及其试剂盒。

【背景技术】

在核酸扩增法中，有由聚合酶的扩增错误、由混杂物质等的扩增抑制、样品调制时的误操作等，由各种要因得不到适宜的结果的情况。因此，有对核酸扩增适宜地进行与否进行精度管理的必要。

在Appl.Environ.Mocrobiol.2001.67,3985-3993中公开有，有与目标核酸结合相同的引物组的区域，与检测目标核酸的检测用探针有结合不同的探针的区域的，对照多核苷酸。通过用检测目标核酸的检测用探针和检测对照多核苷酸的探针标记不同的荧光染料，可在相同反应槽中同时区别检测各自的扩增产物(第3986页、右栏“Primes,Probes,andPCR assay”的项、及第3990页、图2)。

【发明内容】

【发明要解决的技术课题】

近年，作为检测样品中的成为目标的核酸分子(以下也称为“目标核酸”)的方法，开发有数字核酸检测。具体而言，在微孔或液滴等的隔区化的区域(以下也简称为“隔区”)中收容各1分子目标核酸，通过在各隔区中进行核酸扩增，高灵敏度地检测核酸分子的方法。非专利文献1中记载的方法被认为也能在数字核酸检测法中应用，但为了在目标核酸和对照多核苷酸中使用不同的探针，难以评价用于检测目标核酸的探针正常发挥功能与否。

本发明人完成了在数字核酸检测中适宜地使用的精度管理方法。即，本发明人发现，在数字核酸检测中，在能结合与目标核酸相同的引物组的区域、能结合上述引物组的区域间，通过使用有与目标核酸不同的个数的寡核苷酸，可对能结合目标核酸检测用探针的区域进行精度管理。

【解决课题的技术方案】

本发明的第1实施方式是核酸扩增的精度管理方法，其包括核酸检测工序和判断工序。上述核酸检测工序包括：调制核酸样品的工序，所述核酸样品含目标核酸和精度管理用多核苷酸、调制含上述目标核酸一分子的隔区和含上述精度管理用多核苷酸一分子的隔区的工序、在上述各隔区中进行上述核酸样品中所含的上述目标核酸或上述精度管理用多核苷酸的核酸扩增，使用检测用探针检测上述检测用探针引发的信号的工序。在判断工序中，基于上述信号检测工序的结果，判断上述核酸检测工序适宜或不适宜。含上述目标核酸检测序列。上述精度管理用多核苷酸是以下的(1)、(2)或(3)。

(1)含以下第1区域、第2区域及第3区域的单链多核苷酸：上述第1区域含能结合目标核酸扩增用的第1引物的序列；上述第2区域含与能结合目标核酸扩增用的第2引物的序列互补的序列；及上述第3区域含检测序列及与上述检测序列互补的序列的任一方或两方、

(2)含与上述(1)的序列互补的序列的单链多核苷酸、

(3)含上述(1)的多核苷酸和上述(2)的多核苷酸的双链多核苷酸

上述检测用探针含与上述检测序列互补的序列。

上述(1)的精度管理用多核苷酸中的检测序列和与上述检测序列互补的序列的合计数与上述目标核酸中的检测序列的数不同。

【发明效果】

由本发明提供数字核酸检测法中的精度管理方法。

【附图说明】

【图1】显示实施方式1涉及的核酸检测工序的模式图。