[发明专利]一种与奶山羊产奶量性状相关的分子标记及其应用

权利要求书

1.一种与奶山羊产奶量性状相关的分子标记，其特征在于，其核苷酸序列如下所示：

GGGACCAGGGGACGGATGTCGGTGGCCTGCGCCCCAGCTCGCGGGCACCGTGCCCCCAAC

TGCTTCCTTCTCAGATTCCGAAGAGCGCCTTGAGGCCAGGGAAGGGAGCAGGGCTTACCA

GCCMGGGGCAGGGACTCGGAGCCCGTGACCCGCGCTGACGTAGGCAAACTGGGTGC

上述序列124位突变位点的M是A或C，该突变导致SmaⅠ-RFLP多态性。

2.一种检测与奶山羊产奶量性状相关的基因片段突变的引物对，其特征在于，其DNA序列如下所示：

Sma1F:GGGACCAGGGGACGGATGTCG

Sma1R1:GCACCCAGTTTGCCTACGTCAGCGCGGGTACCGGGCTCCGAGTCCCTGC。

3.权利要求1所述的与奶山羊产奶量性状相关的分子标记的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.以山羊H-FABP基因序列为模板，设计引物对H-FABPF5、H-FABPR5，其DNA序列如SEQID NO.4-5所示；

S2.构建PCR反应体系，以奶山羊基因组DNA为模板利用S1所得引物进行PCR扩增；

S3.步骤S2所得PCR产物测序，测序序列与山羊H-FABP基因比对，获得奶山羊H-FABP基因部分序列589bp的片段，其序列如SEQ ID NO.6所示；

S4.以步骤S3测序的589bp序列为模板设计一对引物Sma1F、Sma1R1，其DNA序列如SEQID NO.2-3所示；

S5.构建PCR反应体系，以奶山羊基因组DNA为模板利用S4所得引物进行PCR扩增；所得PCR产物测序，获得与奶山羊产奶量性状相关的分子标记，其DNA序列如SEQ ID NO.1所示，所述序列124位突变位点的M是A或C，该突变导致SmaⅠ-RFLP多态性。

4.如权利要求3所述的与奶山羊产奶量性状相关的分子标记的制备方法，其特征在于，步骤S2和S5中所述PCR反应体系为：1μL的50ng/μL的奶山羊外周血基因组DNA，12.5μL的2×PCR Mix，0.75μL10mM的正向引物,0.75μL10mM的反向引物,10μL的ddH₂O。

5.如权利要求3或4所述的与奶山羊产奶量性状相关的分子标记的制备方法，其特征在于，步骤S2和S5中所述PCR扩增条件为：95℃5min；94℃30s，60℃30s，72℃30s，30个循环，72℃延伸10min。

6.如权利要求3所述的与奶山羊产奶量性状相关的分子标记的制备方法，其特征在于，步骤S2和S5中所述基因组DNA为随机选取崂山奶山羊群体3个及以上个体基因组DNA，等量混合所得。

7.如权利要求3或6所述的与奶山羊产奶量性状相关的分子标记的制备方法，其特征在于，步骤S5中PCR扩增产物经SmaⅠ酶切后产生124bp和52bp两条带，说明该个体H-FABP两个等位基因124位突变位点均为C，判定为CC基因型；PCR产物经SmaⅠ酶切后产生176bp、124bp和52bp三条带，说明该个体H-FABP两个等位基因124位突变位点分别为A和C，判定为AC基因型；PCR产物经SmaⅠ酶切后产生176bp一条带，说明该个体H-FABP两个等位基因124位突变位点均为A，判定为AA基因型。

8.权利要求1所述的与奶山羊产奶量性状相关的分子标记在奶山羊产奶量分子标记辅助选育中的应用，其特征在于，序列124位是CC基因型的产奶量高于AC基因型。

9.权利要求2所述的引物对在奶山羊产奶量分子标记辅助选育中的应用。