[发明专利]一种以邻苯二酚为底物高效合成咖啡酸的方法有效
| 申请号： | 201611166591.5 | 申请日： | 2016-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN106591383B | 公开（公告）日： | 2020-09-04 |
| 发明（设计）人： | 周景文;陈坚;吕永坤;堵国成 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12P7/42 | 分类号： | C12P7/42;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 彭素琴 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 邻苯二酚 高效 合成 咖啡 方法 | ||
1.一种咖啡酸的生物合成方法，其特征在于，以一种共表达酪氨酸苯裂合酶EhTPL和酪氨酸氨基裂合酶RgTAL的重组大肠杆菌，催化底物邻苯二酚、丙酮酸钠和氯化铵，合成咖啡酸，所述的酪氨酸苯裂合酶EhTPL来源于草生欧文氏菌(Erwinia herbicola)，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的酪氨酸氨基裂合酶RgTAL来源于粘红酵母(Rhodotorulaglutinis)，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的大肠杆菌为大肠杆菌BL21(DE3)，所用的表达载体为pET28a(PB)；全细胞转化体系中重组大肠杆菌的浓度是OD600＝18±1；底物为10–100mM的邻苯二酚，NH4Cl、丙酮酸钠和邻苯二酚的浓度的比例为13：1：1；反应温度为25–42℃。
2.根据权利要求1所述的一种咖啡酸的生物合成方法，其特征在于，所述重组大肠杆菌含有通过pET28a(PB)以假操纵子的结构顺序表达EhTPL和RgTAL基因的重组质粒pPsdOpr2。
3.根据权利要求1所述的一种咖啡酸的生物合成方法，其特征在于，所述重组大肠杆菌含有通过pET28a(PB)以单顺反子的结构顺序表达EhTPL和RgTAL基因的重组质粒pMnCisTr2。
4.根据权利要求1所述的一种咖啡酸的生物合成方法，其特征在于，全细胞转化体系中重组大肠杆菌的浓度是OD600＝18±1，转化体系中还含有0.65M NH4Cl、50mM丙酮酸钠和50mM邻苯二酚作为底物，在37℃、220rpm条件下进行全细胞转化。
5.一种重组大肠杆菌，其特征在于，共表达酪氨酸苯裂合酶EhTPL和酪氨酸氨基裂合酶RgTAL，通过pET28a(PB)以假操纵子或单顺反子的结构顺序表达EhTPL和RgTAL基因，所述的酪氨酸苯裂合酶EhTPL来源于草生欧文氏菌(Erwinia herbicola)，其氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示，所述的酪氨酸氨基裂合酶RgTAL来源于粘红酵母(Rhodotorula glutinis)，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述的大肠杆菌为大肠杆菌BL21(DE3)，所用的表达载体为pET28a(PB)；所述重组大肠杆菌催化底物邻苯二酚、丙酮酸钠和氯化铵，合成咖啡酸。
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