[发明专利]一种辅助鉴定大豆百粒重性状的分子标记HNUSOY05及其应用

权利要求书

1.一种辅助鉴定大豆百粒重性状的分子标记HNUSOY05，其特征在于，所述分子标记核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；具有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的大豆表现为高百粒重；缺失SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的大豆表现为低百粒重；所述高百粒重是指籽粒的百粒重≥20.0克；所述低百粒重是指籽粒百粒重≤12.0克。

2.权利要求1所述分子标记HNUSOY05在大豆百粒重性状遗传育种、大豆百粒重性状辅助鉴定、大豆百粒重性状筛选中的应用。

3.一种权利要求1所述分子标记HNUSOY05的引物对，其特征在于，所述引物对的上游引物HNUSOY05F的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，下游引物HNUSOY05R的核苷酸序列如SEQID NO.3所示。

4.权利要求3所述分子标记HNUSOY05的引物对在大豆百粒重性状遗传育种、大豆百粒重性状辅助鉴定、大豆百粒重性状筛选中的应用。

5.一种利用权利要求3所述分子标记HNUSOY05的引物对鉴定大豆百粒重性状的方法，其特征在于，以待测大豆基因组DNA为模板，利用权利要求3所述分子标记HNUSOY05的引物对进行PCR扩增；扩增产物采用琼脂糖凝胶电泳检测；若检测得到长度为637 bp的单一片段，则待测大豆品种具有高百粒重性状；若检测得到长度为446 bp的单一片段，则待测大豆品种具有低百粒重性状；所述高百粒重是指籽粒的百粒重≥20.0克；所述低百粒重是指籽粒百粒重≤12.0克。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，具体步骤如下：

1)提取待检测大豆样品中的基因组DNA；

2)以步骤1）所得的待检测大豆样品基因组DNA为模板，利用权利要求3所述的分子标记HNUSOY05的引物对进行PCR扩增反应，获得PCR产物；每25μL所述PCR反应体系包含2.5mmol/L MgCl₂、1 U rTaq酶、800 μmol/L dNTP、0.2 μmol/L 上游引物HNUSOY05F和下游引物HNUSOY05R、50 ng模板基因组DNA；

3)利用步骤2）所得PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳；若检测得到长度为637 bp的单一片段，则待测大豆品种具有高百粒重性状；若检测得到长度为446 bp的单一片段，则待测大豆品种具有低百粒重性状。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，步骤2）所述PCR扩增反应为降落PCR扩增反应。

8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述降落PCR扩增反应的程序为94℃预变性7min；94℃变性20 s，60℃退火20 s，每个循环降0.5℃，72℃延伸30 s，30个循环；94℃变性20 s，45℃退火20 s，72℃延伸30 s，10个循环；72℃终延伸7 min。