[发明专利]葡萄生物防霉保鲜方法

权利要求书

1.一种葡萄生物防霉保鲜方法，其特征在于：包括葡萄的分选、SO₂熏蒸、防霉剂施用、CA贮藏，步骤如下：

⑴葡萄的分选：

采收成熟度较高，全红色，并且含糖量14％以上的葡萄，用果剪剔除有机械伤、破损、霉腐变质的果粒，0℃±1℃库体贮藏间内预冷12h；

⑵SO2熏蒸：

采用SO₂低剂量首次300ppm熏蒸10小时，杀灭田间病原菌，葡萄霉菌量低于100spores/kg；

⑶表面喷施，在葡萄表面喷施生物保鲜剂，生物保鲜剂的配方如下：重量份数

100份无菌水中加入海藻糖1～3份、甘油4～5份、环氧大豆油3～4份和壳聚糖0.2～0.4份，5～10份的几丁质酶、5～8份的角质酶、8～10份的纤维素酶。

生物保鲜剂复性剂的制备方法：

100份无菌水中加入海藻糖1～3份、甘油4～5份、环氧大豆油3～4份和壳聚糖0.2～0.4份，并500～600r/min搅拌1-1.5小时，使其完全溶解，5～10份的几丁质酶、5～8份的角质酶、8～10份的纤维素酶，500～600r/min搅拌20～30分钟混匀，所制备生物保鲜剂置于0℃～4℃条件下保存；

复性剂为：将0.5～0.6份Mg²⁺、0.3～0.5份的Mn²⁺，并用10份的0.1mol/L磷酸缓冲液，充分混匀，调节pH 7.2～7.9，以提升酶活性；使用时活化保鲜剂后喷施于果蔬表面，自然晾干后于适宜温度、湿度和气体条件下贮藏。

⑷贮藏：

采用厚度为0.03mm葡萄PVC专用透湿保鲜袋，将保鲜袋扎口于0℃±1℃贮藏；包装袋内O₂浓度2％～3％，CO₂浓度1％～5％，湿度控制在90％～95％。

2.根据权利要求1所述的葡萄生物防霉保鲜方法，其特征在于：所述生物保鲜剂的制备方法如下：

⑴由苏云金芽孢杆菌CICC 23702产生几丁质酶：

采用磁化水代替蒸馏水制备培养基，培养基中加0.8～1.0％的Mg²⁺、0.3％～0.5％的Mn²⁺以及0.2～0.3wt％的几丁质配成高产几丁质酶的诱导培养液；在红光条件下，加入30～40mL的增殖诱导培养基培养4d，复合诱导苏云金芽孢杆菌高产几丁质酶，培养液采用超声频率为15KHz-20KHz的超声波进行细胞破碎并纯化以敲除几丁质酶杂基，然后5000r/min低温离心20min后收集上清液，调节pH5.5～5.8至该几丁质酶等电点，沉淀提取分离；

⑵由从葡萄中分离的灰霉诱导产生角质酶、纤维素酶

诱导条件：将10⁸spore/mL灰霉菌孢子加5mL霉菌增殖培养基中，其中培养基中加入0.8％～1.2％的角质酶和2.0％～2.5％的纤维素酶以诱导霉菌高产角质酶和纤维素酶，28℃培养4d后，5000r/min冷冻低温离心10min～20min，以除去菌体和培养基残渣，取上清液调节上清液pH6.2-6.9至两酶等电点，沉淀提取生物活性物质角质酶和纤维素酶；

⑶防霉保鲜剂配方：重量份数

100份无菌水中加入海藻糖1～3份、甘油4～5份、环氧大豆油3～4份和壳聚糖0.2～0.4份，并500～600r/min搅拌1-1.5小时，使其完全溶解，5～10份的几丁质酶、5～8份的角质酶、8～10份的纤维素酶，500～600r/min搅拌20～30分钟混匀，所制备拮抗菌素防霉剂置于0℃～4℃条件下保存；

⑷保鲜剂使用前首先进行抗菌酶复性

复性加入复性剂，复性剂为：将0.5～0.6份Mg²⁺、0.3～0.5份的Mn²⁺，并用10份的0.1mol/L磷酸缓冲液，混匀，调节pH 7.2～7.9；

所述步骤⑴的诱导培养液成分为：蛋白胨5.0g，牛肉浸膏3.0g，NaCl 5.0g，蒸馏水1L，pH7.0，121℃灭菌20min备用；

所述霉菌增殖培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000mL，121℃灭菌20min。

3.根据权利要求1所述的葡萄生物防霉保鲜方法，其特征在于：所述防霉保鲜剂：复性剂重量分数比为：1-10：100。

4.根据权利要求1所述的葡萄生物防霉保鲜方法，其特征在于：所述生物保鲜剂的应用系统如下：包括库体贮藏间，高压空气发生器，保鲜剂配液罐，一次压力雾化器，二次压力喷器，在库体内的一侧放置保鲜剂配液罐，配液罐的出口通过管道连接一次雾化器，高压空气发生器通过管道分别给一次压力雾化器和二次压力喷器供压缩空气，一次压力雾化器的进液口通过管道与保鲜剂配液罐连接，为一次压力雾化器提供液体；

在一次压力雾化器的外部密封安装一外罩，外罩通过管道连接二次压力喷器进液口，将一次雾化后的微小液体输送至二次压力喷器，作为二次雾化的液体来源，一次压力雾化器和二次压力雾化器与现有的压力雾化器结构相同，本申请首次将其进出串联，使液体进行二次雾化，得到颗粒更小，分散度更加均匀的粒径小于1μm的气相粒子；在库体另一侧连通一个压力平衡装置，排气管端部延伸至水槽中；所述保鲜剂配液罐内放置权利要求1所述的生物保鲜剂。