[发明专利]一种高精氨酸混合肽的制备方法及其在肺癌治疗中的应用

说明书

本发明涉及一种高精氨酸含量的混合肽及其在肺癌治疗中的应用。所述制备方法包括如下步骤：利用超高压对核桃粕和蛋清蛋白混悬液进行预处理，其后在超声波、微波辅助作用下使用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶分步酶解预处理产物；酶解液过滤后的清液经反相高效液相色谱法分离其中的目标混合肽；以此混合肽为模板分子，丙烯酸、甲基丙烯酸为功能单体，三乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，异丙基硫杂蒽酮为引发剂，紫外引发聚合形成表面分子印迹膜，用于分离富集酶解清液中的目标混合肽。所述混合肽中精氨酸含量在18％以上；经MTT法检测发现，所述高精氨酸混合肽能有效抑制人肺癌GLC‑82细胞的增殖。本法有助于降低产品成本，加速实现工业化生产。

技术领域

本发明涉及一种高精氨酸混合肽的制备方法及其在肺癌治疗中的应用，具体涉及一种以核桃粕、蛋清蛋白为原料制备富含精氨酸的混合肽的方法及其在肺癌治疗中的应用。

背景技术

癌症是恶性肿瘤的统称，特点是机体细胞失去正常的调节控制，过度增殖，同时有不同程度的分化障碍，并常侵犯邻近组织或转移到远离部位。它严重威胁全人类健康，位居非正常死亡原因之首。世界卫生组织(WHO)2014年发布的《全球癌症报告》显示，2012年中国的新增癌症病例高居全球第一位，其中肺癌的新增病例和死亡人数均居世界首位。2015年，国家卫计委、国家发改委等16个部门联合发布的《中国癌症防治三年行动计划(2015-2017年)》中明确指出，我国的癌症防治要以最高发、危害最大的8项癌症为重点，而肺癌即是我国八大癌之一。

针对恶性肿瘤，传统的治疗方法包括手术切除、化疗、放疗等。这些方法在一定程度上起到了治疗肿瘤的作用，但一旦发生癌细胞局部扩散或潜在转移，治疗往往以失败告终。且这些传统疗法不可避免地会对人体正常细胞、自身免疫系统造成不同程度的伤害，引起呕吐、食欲不振、头痛失眠、脱发溃疡、糜烂发炎、血象下降等不良反应，病人常因身体难以承受而无法继续接受治疗，严重影响癌症患者生存质量。

现代科学研究发现，许多天然生物活性肽对抑制肿瘤细胞增殖和转移具有良好功效，且选择性高、毒副作用小。这些活性肽通过诱导肿瘤分化、抑制肿瘤细胞生长、抑制肿瘤新生血管生成、提高肿瘤细胞对药物的敏感性、降低化疗损伤、增强药物对肿瘤细胞的杀伤力、干扰肿瘤细胞DNA合成、提高机体免疫力等作用达到治疗或辅助治疗恶性肿瘤的目的。近年来不断有研究证实，增量精氨酸对肿瘤细胞的抑制及诱导凋亡作用显著。肿瘤细胞中多胺代谢活跃，多胺是其迅速分裂、增殖必需物质，增量精氨酸能通过抑制鸟氨酸脱羧酶活性来抑制多胺的生物合成，从而抑制癌细胞增殖；精氨酸经一氧化氮合酶作用后生成NO，NO可阻断肿瘤细胞的能量代谢和DNA复制，或者引起肿瘤细胞DNA损伤，从而抑制肿瘤细胞的生长或引起肿瘤细胞死亡；同时，NO可抑制细胞黏附分子的表达，从而阻止细胞的黏附，在肿瘤细胞脱离原发组织，转移至其它部位形成新病灶的过程中，这些黏附分子起着重要作用；此外，精氨酸还能增加T淋巴细胞的产生和功能，增加体内白介素IL-2的生成及其受体表达，调节和激活体内巨噬细胞活性，从而提高肿瘤宿主自身免疫力。国外已有研究开始尝试对癌症患者采用不平衡氨基酸疗法，通过调整肿瘤宿主体内某些氨基酸的含量，干扰肿瘤细胞的代谢和功能，进而抑制肿瘤的生长或诱导其凋亡。另有报道称，富含精氨酸等亲水性氨基酸的亲水性多肽，可通过静电吸引方式，特异性作用于肿瘤细胞，导致细胞膜迅速破裂，细胞内容物渗漏，最终引起细胞死亡；也有研究称多肽分子结构中的碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸等)对其抗肿瘤活性有一定影响。这些都为本发明所述的高精氨酸混合肽的抑癌功效提供了坚实的理论基础。

核桃粕是核桃加工副产品，蛋白质消化率高、氨基酸含量丰富且种类齐全，但在我国主要用于饲料工业，深度加工不够而造成资源贬值；鸡蛋清蛋白不仅富含人体8种必需氨基酸，且组成与人体蛋白的氨基酸组成接近，人对其消化利用率极高。本发明首次使用来自鸡蛋和核桃的动、植物混合蛋白为原料，通过超高压-超声-微波辅助酶解、表面分子印迹膜分离纯化等手段，制备富含精氨酸的活性混合肽，并将其应用于肺癌治疗，在对患者进行营养补充的同时抑制癌细胞增殖，有效改善肺癌患者的生存质量。与之相关的应用研究至今未见报道。

发明内容