[发明专利]一株不依赖于甲硫氨酸的头孢菌素高产基因工程菌株的构建及其应用

说明书

本发明公开了一株不依赖于甲硫氨酸的头孢菌素高产基因工程菌株的构建及其应用。本发明提供了重组顶头孢霉菌，为将顶头孢霉菌基因组上的Acppm1蛋白编码基因替换为标记基因，得到的重组菌；本发明的实验证明了，本发明敲除顶头孢霉菌的Acppm1基因得到Acppm1基因敲除重组菌；该重组菌在去掉甲硫氨酸CPC的发酵水平反而较出发菌株提高了3倍。可以看出，敲除Acppm1基因可以使重组菌不仅在发酵过程中省去了甲硫氨酸的添加，而且提高了现有菌株的CPC发酵水平。

技术领域

本发明属于应用工业微生物领域，尤其涉及一株不依赖于甲硫氨酸的头孢菌素高产基因工程菌株的构建及其应用。

背景技术

头孢菌素C(Cephalosporin C，CPC)是生产头孢类抗生素重要中间体7-氨基头孢烷酸(7-ACA)的主要原料。目前，工业上主要利用顶头孢霉菌(Acremonium chrysogenum)来发酵获得CPC。头孢菌素C在顶头孢霉菌中的生物合成途径已经基本研究清楚，且顶头孢霉菌的遗传操作系统相对成熟，这为利用基因工程手段定向改造这一重要的工业真菌奠定了良好基础。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种重组顶头孢霉菌。

本发明提供的重组顶头孢霉菌，为抑制顶头孢霉菌基因组上的Acppm1蛋白活性，得到的重组菌；

所述Acppm1蛋白是如下1)或2)：

1)序列表中序列2所示的蛋白质；

2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由序列2衍生的蛋白质。

上述重组菌中，所述抑制顶头孢霉菌基因组上的Acppm1蛋白活性为敲除所述顶头孢霉菌基因组上的Acppm1蛋白编码基因。

上述重组菌中，所述敲除所述顶头孢霉菌基因组上的Acppm1蛋白编码基因为将顶头孢霉菌基因组上的Acppm1蛋白编码基因替换为标记基因；

所述Acppm1蛋白编码基因的核苷酸序列为序列表中序列1。

上述重组菌中，所述标记基因为潮霉素B编码基因；

所述潮霉素B编码基因的核苷酸序列具体为序列表中序列6。

上述重组菌的保藏编号为CGMCC NO.12103。

本发明的另一个目的是提供一种产生头孢菌素的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：在甲硫氨酸缺失体系中发酵上述的重组菌，得到头孢菌素。

本发明第三个目的是提供一种蛋白。

本发明提供的蛋白，是如下1)或2)：

1)序列表中序列2所示的蛋白质；

2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由序列2衍生的蛋白质。

为了使(1)中的蛋白质便于纯化，可在由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1标签的序列