[发明专利]一种源自假丝酵母的抗草甘膦相关蛋白及其编码基因与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种源自假丝酵母的抗草甘膦相关蛋白及其编码基因与应用。

背景技术

草甘膦理化性质稳定，具有低毒、低残留、高效、广谱、灭生性等优点，是全世界除 草剂使用量最大的品种之一。但是草甘膦在杀灭杂草的同时对农作物同样有着毒害作用， 从而限制了其使用时间和使用范围。如果有对草甘膦具有抗性或降解作用的农作物出现， 则有利于草甘膦在农业生产中的应用并降低生产成本。因此，抗除草剂基因的发掘与利用 已成为当今生物基因工程领域研究的重点。

草甘膦作为一种芳香族氨基酸合成过程中的抑制剂，其主要作用靶标是5-烯醇丙 酮莽草酸-3-磷酸脂合成酶(EPSPS)。EPSPS存在于所有植物叶绿体、真菌和细菌中，它催化 莽草酸-3-磷酸和磷酸烯醇丙酮酸合成EPSP，从而进一步合成芳香族氨基酸。因为EPSPS被 草甘膦抑制，使经EPSPS催化由磷酸烯醇式丙酮酸与莽草酸-3-磷酸向5-烯醇丙酮莽草酸- 3-磷酸的转变过程停止，植物中的莽草酸含量增加，芳香族氨基酸合成减弱或停止，随之植 物失绿而死亡。

发明内容

本发明的目的是提供一种源自假丝酵母的抗草甘膦相关蛋白及其编码基因与应 用。

本发明提供的蛋白，获自假丝酵母，命名为EPSPS蛋白，是如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或 缺失和/或添加且与草甘膦抗性相关的由序列1衍生的蛋白质。

为了使(a)中的蛋白质便于纯化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的 蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1标签的序列

标签 残基 序列 Poly-Arg 5-6(通常为5个) RRRRR Poly-His 2-10(通常为6个) HHHHHH FLAG 8 DYKDDDDK Strep-tag II 8 WSHPQFEK c-myc 10 EQKLISEEDL

上述(b)中的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。 上述(b)中的蛋白质的编码基因可通过将序列表中序列2所示的DNA序列中缺失一个或几个 氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端 连上表1所示的标签的编码序列得到。

编码所述EPSPS蛋白的基因(EPSPS基因)也属于本发明的保护范围。

所述EPSPS基因是如下(1)或(2)或(3)的DNA分子：