[发明专利]一种DNA合成产物的高通量检测方法

权利要求书

1.一种DNA合成产物的高通量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将合成产生的多个DNA组件分别连入克隆载体并分别转入筛选菌株中，分别在筛选培养基上培养，筛选出连接有所述DNA组件的克隆；

2)分别对每个DNA组件的各克隆进行顺次编号；

3)分别选取编号相同但DNA组件不同的克隆混合培养出相应混合菌液，再提取质粒得到混合质粒样本；或分别将每个DNA组件的克隆培养出相应菌液，再选取编号相同但DNA组件不同的克隆的菌液混合并提取质粒得到混合质粒样本；

4)对多个所述混合质粒样本分别连接测序标签，构建多个混合测序文库，其中不同混合测序文库的测序标签不同；

5)将所述多个混合测序文库进行混样高通量测序，得到所选取的克隆所载的DNA组件的序列；

6)通过将所述测序得到的DNA组件的序列与参考序列进行比对，得到所述DNA合成产物中具有设定正确率的目标DNA组件。

2.根据权利要求1所述的DNA合成产物的高通量检测方法，其特征在于，所述DNA合成产物为DNA芯片合成组装出的DNA组件。

3.根据权利要求1所述的DNA合成产物的高通量检测方法，其特征在于，所述步骤1)和2)之间，还包括：挑取筛选出的克隆进行菌落PCR验证，进一步筛选出插入片段大小与相应DNA组件的大小一致的克隆。

4.根据权利要求1所述的DNA合成产物的高通量检测方法，其特征在于，所述步骤3)中，按照各克隆菌体数量相同的原则进行克隆菌液混合。

5.根据权利要求4所述的DNA合成产物的高通量检测方法，其特征在于，分别将每个DNA组件的克隆培养出的相应菌液保菌备用。

6.根据权利要求1所述的DNA合成产物的高通量检测方法，其特征在于，所述步骤4)具体为：分别从所述混合质粒样本中获取或扩增出混合DNA组件，然后对多个所述混合DNA组件连接测序标签，构建多个混合测序文库，其中不同混合测序文库的测序标签不同。

7.根据权利要求6所述的DNA合成产物的高通量检测方法，其特征在于，还包括，在连接所述测序标签之后，对多个所述混合DNA组件连接测序接头。

8.根据权利要求6所述的DNA合成产物的高通量检测方法，其特征在于，通过酶切或PCR方法，分别从所述混合质粒样本中获取或扩增出混合DNA组件。

9.根据权利要求1所述的DNA合成产物的高通量检测方法，其特征在于，所述步骤5)中使用Illumina HiSeq2000、HiSeq2500、MiSeq、MiSeqDx、NextSeq500、Hiseq X ten、LifeSOLiD、Ion TorrentPGM、Proton、Roche 454、Complete Genomics测序装置或单分子测序装置进行高通量测序。

10.根据权利要求1所述的DNA合成产物的高通量检测方法，其特征在于，所述设定正确率是指碱基正确率为100％。

11.根据权利要求1所述的DNA合成产物的高通量检测方法，其特征在于，还包括：当所述设定正确率低于100％时，通过单点突变进行序列除错。

12.根据权利要求11所述的DNA合成产物的高通量检测方法，其特征在于，当所述设定正确率低于100％时，挑选单点突变、插入或缺失变异数量最少的克隆，通过单点突变进行序列除错。

13.根据权利要求11所述的DNA合成产物的高通量检测方法，其特征在于，还包括，通过Sanger测序验证所述序列除错产物。

14.根据权利要求1所述的DNA合成产物的高通量检测方法，其特征在于，还包括：通过Sanger测序验证所述目标DNA组件。