[发明专利]TP重组抗原及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种TP重组抗原及其制备方法和应用，该TP重组抗原包括依次连接的嵌合表达多肽以及有助于可溶性表达的柔性链接肽，所述嵌合表达多肽为TPN15‑TPN17‑TPN47嵌合表达多肽。这种TP重组抗原通过引入有助于可溶性表达的柔性链接肽对TPN15‑TPN17‑TPN47嵌合表达多肽进行修饰，相对于传统的TP抗原，这种TP重组抗原的蛋白活性较好。

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，特别是涉及一种TP重组抗原及其制备方法和应用。

背景技术

梅毒是一种性传播疾病，其病原体是梅毒螺旋体，也叫苍白螺旋体(Treponemapallidum，TP)，主要通过性接触和血液传播，并产生多种多样的症状和体征，且时隐时显，病程可持续很长，几乎可侵犯全身各器官。是仅次于艾滋病的严重危害我国人民身体健康的性传播疾病，近年来在我国有上升的趋势，据2014年梅毒重点疫情报告，2009年以来梅毒位于乙类传染病报告发病数的第三位；尤其是在产前门诊筛查出的梅毒抗体阳性的孕妇显著增加，给我国的公共卫生带来新的问题。

国内外对梅毒的发病机制和诊断方式进行了大量的研究，梅毒的诊断和治疗后效果评价一直是利用体液免疫学指标，目前国内对血源筛选还有部分采用RPR和TRUST方法，其主要缺点是敏感性和特异性不高，许多非梅毒性疾病，包括类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、慢性迁延性肝炎等均可呈阳性反应。而荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验和梅毒螺旋体血凝试验虽大大改善了检测的特异性，但是需制备大量病原体，且质量难以控制，也不利于大规模的血液筛查工作。因此，研制快速、简便、灵敏且特异的诊断试剂是当前的主要任务。

目前应用比较广泛的梅毒螺旋体血清检测方法为酶联免疫吸附试验(ELISA)和胶体金或乳胶快速检测。此方法以抗原-抗体的特异性识别为基础。酶联免疫吸附试验(ELISA)具有灵敏度高、特异性好的优势，已经成为梅毒检测的主流方法。而胶体金或乳胶法具有快捷、方便的优势，已经应用得越来越广泛。

免疫层析胶体金技术是新型的诊断技术，已得到较为广泛的应用，基本原理如下：利用胶体金标记一种抗原或抗体，在试纸条的硝酸纤维素膜上包被相应的配对抗原或抗体，检测时当样品中含有相应的特异性抗体或抗原时，胶体金标记颗粒和样品中配体相结合形成复合物，然后在硝酸纤维素膜上层析，再被包被的抗原或抗体捕获，形成肉眼可见的检测线(T线)，通过检测线的有无实现对结果的判定。

从方法学上讲，目前梅毒ELISA和胶体金检测用的都是标记物和标记抗原直接标记的双抗原夹心法，其存在的固有缺陷如下：

1、当标记物为酶、发光物质、放射性物质等小标记物时，为了提高灵敏度，需要提高标记比例，但是比例过高会使标记抗原被标记物所包裹，使得抗原表位被包埋而导致抗原活性降低；

2、当标记物为较大的纳米颗粒如使用胶体金、乳胶或其他纳米颗粒类标记物时，理论上最佳的灵敏度状态是标记比例越低灵敏度越高，摩尔比为1：1时灵敏度最高，但由于直接标记过程中，标记抗原用量过低会导致标记沉淀等不易标记因素而使标记比例无法降得过低，从而导致灵敏度偏低，同时标记抗原使用量的提高也会导致特异性降低。因此，急需在现有梅毒双抗原夹心法试剂盒的上面做出进一步的改进，提高试剂盒的灵敏度的同时改善特异性。

80年代初，随着分子生物学技术的发展，特别是基因工程(DNA重组)技术的出现使梅毒螺旋体的研究进入一个新的阶段，梅毒螺旋体的全部基因组DNA序列己经被解析。通过重组梅毒螺旋体DNA的克隆以及在大肠杆菌中的表达，制备出多种重组TP抗原，为梅毒的研究提供了一条新的途径。但原核表达缺乏翻译后修饰功能，有时需要特殊蛋白伴侣一起表达并进一步的进行复性处理或保存缓冲液的摸索才能使其蛋白活性较好的表现出来。

发明内容

基于此，有必要提供一种蛋白活性较好的TP重组抗原及其制备方法和应用。