[发明专利]转基因马铃薯AV43-6-G7品系鉴定的引物、探针和方法

说明书

本发明公开了一种转基因马铃薯AV43‑6‑G7品系鉴定的引物、探针和方法，引物和探针序列是：上游引物Potato AV43‑6‑G7 primerF：5’‑ggtatcaggttctggaataagaccaa‑3’；下游引物Potato AV43‑6‑G7 primerR：5’‑tgtcgtgccagctgcatta‑‘3；探针Potato AV43‑6‑G7 Probe：5’‑FAM‑cccgcgcgttggccgat‑3’BHQ。鉴定方法包括产品DNA的提取、特异性基因的实时荧光PCR扩增和使用荧光定量PCR仪随机软件分析扩增结果并进行结果判定。本发明的优点是快速、特异性强、灵敏度高、操作简便、成本低。

技术领域

本发明属于转基因产品检测鉴定技术，具体地说是使用实时荧光PCR技术进行转基因马铃薯AV43-6-G7品系鉴定的方法。

背景技术

自从转基因番茄首次被批准于1994年，数量和生产转基因（GM）作物的不断增加。按照国际农业生物技术应用服务组织（ISAAA），转基因品种已经被广泛开发与应用。为保护消费者的知情权，许多国家都制定立法，以确定转基因生物成分的阈值水平。用于混合在饲料转基因生物和食品的阈值水平在欧盟为0.9％，在韩国3％，在日本，1％。为了符合转基因生物标识管理规定，并保证产品的合法性和可追溯性，转基因产品的品系检测方法是转基因识别和量化是必不可少的。

马铃薯是最早研究成功转基因植物之一。基因转移技术在马铃薯应用的主要目的包括改善土豆的质量，增强抗病虫害等。1997年之前，孟山都公司在美国开发了抗鞘翅目害虫和马铃薯卷叶病毒的转基因马铃薯。近来，越来越商业化转基因马铃薯的特征集中在提高马铃薯淀粉特性，如转基因马铃薯Amflora转基因土豆AM04-1020。这些转基因马铃薯生产通过基因编码的颗粒结合淀粉合成酶I（GBSSI）的反义抑制直链淀粉的淀粉生成。这些改进的功能将被用在造纸和纺织技术方面和食品工业中。转基因马铃薯性状AV43-6-G7在这项研究中是一个淀粉改良的转基因马铃薯品系，其目的是用于淀粉分离的淀粉产业和淀粉可经历进一步的处理。

发明内容

本发明测定了转基因马铃薯AV43-6-G7外源基因片段的侧翼序列。并根据所确定的序列信息设计了一对引物和Taqman探针以检测外源基因片段和马铃薯内源基因的交界区域。建立了一个特异性检测转鉴定基因马铃薯AV43-6-G7品系的方法。

所述引物序列是：

上游引物Potato AV43-6-G7 primerF：5’-ggtatcaggttctggaataagaccaa-3’；

下游引物Potato AV43-6-G7 primerR：5’-tgtcgtgccagctgcatta-‘3；

探针Potato AV43-6-G7 Probe ：5’-FAM- cccgcgcgttggccgat-3’ BHQ。

转基因马铃薯AV43-6-G7品系鉴定鉴定方法包括产品DNA的提取、特异性基因的实时荧光PCR扩增和使用荧光定量PCR仪随机软件分析扩增结果并进行结果判定。

本发明涉及的转基因马铃薯AV43-6-G7品系鉴定，其中的试剂包括如下：

（1）PCR扩增反应液A

包括1×PCR Master Mix(内含热启动的Taq DNA聚合酶、氯化镁、dNTP)，400nmol/L上下游引物；

上游引物Potato AV43-6-G7 primerF（5’-ggtatcaggttctggaataagaccaa-3’），下游引物Potato AV43-6-G7 primerR（5’-tgtcgtgccagctgcatta-‘3），探针Potato AV43-6-G7 Probe （5’-FAM- cccgcgcgttggccgat-3’ BHQ）