[发明专利]一种监测毕赤酵母发酵终点的方法

权利要求书

1.一种监测毕赤酵母发酵终点的方法，其特征在于，利用测定发酵液的菌浓和电导率指标联合判断毕赤酵母的发酵终点，其包括以下步骤：

(1)发酵液的定时取样：诱导表达开始后定期连续取发酵液样品；

(2)发酵液样品的处理：根据所测定指标的不同对样品进行离心或稀释处理；

(3)测定指标：处理完的样品测定菌浓以及电导率，并绘制菌浓和电导率随诱导时间的变化曲线图；

(4)发酵终点的判断：监测发酵液菌浓和电导率随发酵时间的变化，当菌浓指标达到最高点、电导率降低至28～35mS/cm时为发酵终点。

2.根据权利要求1所述的一种监测毕赤酵母发酵终点的方法，其特征在于，所述需要测定的菌浓指标为菌体湿重、菌体干重、OD₆₀₀中的一种。

3.根据权利要求1所述的一种监测毕赤酵母发酵终点的方法，其特征在于，步骤(1)中定时连续取样为在发酵过程中当诱导表达开始后每12小时取发酵液样品一次，待诱导表达36-48h后增大取样频率，每1-6h取样一次。

4.根据权利要求1或2所述的一种监测毕赤酵母发酵终点的方法，其特征在于，步骤(2)中样品的处理方法为：

(1)测定菌浓中菌体湿重的样品处理方法为：取发酵液样品1～5ml置于预先称重的离心管中于3000～12000rpm离心5～10分钟，弃去上清；

(2)测定菌浓中菌体干重的样品处理方法：取发酵液样品1～5ml置于预先称重的离心管中于3000～12000rpm离心5～10分钟，弃去上清，并置于80℃真空干燥至恒重；

(3)测定菌浓中OD₆₀₀的样品处理方法：将发酵液样品用水稀释100～1000倍，使最终读数在0.2～0.8之间。

5.根据权利要求1所述的一种监测毕赤酵母发酵终点的方法，其特征在于，步骤(2)中测定电导率样品处理方法为：取发酵液样品1～5ml于离心管中，3000～12000rpm离心5～10分钟。

6.根据权利要求1所述的一种监测毕赤酵母发酵终点的方法，其特征在于，步骤(3)中电导率的测定，其特征在于离心后的样品用纯水稀释5～10倍后检测电导率。

7.根据权利要求1所述的一种监测毕赤酵母发酵终点的方法，其特征在于，步骤(4)中发酵终点的判断方法为：监测发酵液菌浓和电导率随诱导时间的变化，当菌浓增加缓慢接近最高点或达到最高点后开始下降，同时电导率降低至28～35mS/cm，即为发酵终点。

8.根据权利要求1或7任一项所述的一种监测毕赤酵母发酵终点的方法，其特征在于，当菌浓增加缓慢接近最高点或达到最高点后开始下降，同时电导率降低至30～32mS/cm，即为发酵终点。

9.根据权利要求1所述的一种监测毕赤酵母发酵终点的方法，其特征在于，毕赤酵母发酵为在发酵罐中利用毕赤酵母进行甲醇诱导表达外源蛋白的过程。