[发明专利]一种同时检测三种引起马铃薯块茎坏死的病毒的三重RT-PCR方法及其引物组合

说明书

技术领域

本发明属于作物病毒检测技术领域，具体涉及一种同时检测能引起马铃薯块茎发生坏死的马铃薯Y病毒块茎坏死株系（PVY^NTN）、番茄斑萎病毒（TSWV）、马铃薯帚顶病毒（PMTV）三种病毒的方法及其引物组合。

背景技术

马铃薯又称土豆、洋芋等，是人们日常生活中常见的粮食及蔬菜作物，作为粮食作物来说，是世界上仅次于小麦、玉米和水稻的第四大粮食作物。中国是世界马铃薯第一生产大国，2011年播种面积约542.5万公顷、总产约8829万吨，均居世界首位，分别约占世界的1/4和1/5。虽然我国马铃薯的栽培面积和总产量居世界首位，但是单产远不及马铃薯生产先进国家，低于世界平均水平。马铃薯通过块茎进行无性繁殖，生产过程中易受到病毒的侵染，侵染马铃薯的病毒种类达40种。马铃薯受病毒侵染后，能通过种薯进行传播，造成马铃薯种性退化，而且危害程度逐代加重，严重影响马铃薯的产量及品质；目前世界上防治马铃薯病毒病最好的方法是使用脱毒种薯，达到提高马铃薯产量和品质的目的，因此，脱毒种薯普及率低及马铃薯病毒病危害严重是制约我国马铃薯单产提高主要因素。

马铃薯Y病毒（potatovirusY，PVY）是马铃薯病毒属的典型成员之一，全球危害马铃薯最为严重的病毒之一，最高可使马铃薯减产80%；PVY^NTN是PVY的一种株系，除造成马铃薯减产外，还能诱导马铃薯块茎发生环状坏死，是我国马铃薯Y病毒的主要株系（HuX，HeC，XiaoY，XiongX，NieX.MolecularcharacterizationanddetectionofrecombinantisolatesofpotatovirusYfromChina.ArchVirol，2009，154:1303–1312）^]。番茄斑萎病毒（Tomatospottedwiltvirus，TSWV)，是番茄斑萎病毒属（Tospovirus）的代表成员，广泛分布于世界各地，能侵染80多科1000多种植物；TSWV已在我国云南、广州、浙江等多个地区存在，并呈扩散趋势；TSWV感染马铃薯后，通常造成块茎变小，产量降低，还可造成马铃薯块茎出现坏死症状，影响马铃薯的品质（AbadJA,MoyerJW,KennedyGG,HolmesGA,andCubetaMA.TomatospottedwiltvirusonPotatoinEasternNorthCarolina.AmerJofPotatoRes2005，82:255-261）。马铃薯帚顶病毒（Potatomop-topvirus，PMTV）是马铃薯帚顶病毒属（Pomovirus）的典型成员之一，已在欧洲、北美洲、南美洲、亚洲流行，在我国也有发现；PMTV主要通过土壤中或者块茎上的粉痂菌传播，马铃薯感染PMTV后可造成马铃薯块茎表皮和薯肉出现环状或弧状坏死症状（XuH,DeHaanTL,DeBoerSH.DetectionandConfirmationofPotatomop-topvirusinPotatoesProducedintheUnitedStatesandCanada[J].PlantDisease,2004,88(4):363-367）；因此，这3种病毒在引起马铃薯减产的同时，都能引起块茎发生坏死症状，使其失去商品性，比一般的病毒危害更为严重。

一般而言，病毒引起块茎坏死的症状是马铃薯品种对病毒的过敏性抗性反应；根据已有研究发现，PVY^NTN、TSWV、PMTV这三种病毒都能诱导马铃薯块茎产生坏死症状，根据块茎坏死症状难以辨别出是哪种病毒危害所致，因为PVY是马铃薯主要危害病毒，在生产上容易将TSWV、PMTV病毒病诱导的症状误认为是PVY^NTN诱导产生的症状，从而无法及时做出正确的防治措施，给农民带来一定的经济损失。