[发明专利]胰岛素淀粉样多肽抑制剂及其制备方法、应用

说明书

技术领域：

本发明涉及药物领域，具体涉及用于治疗糖尿病的多肽化合物。

背景技术

糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病，是由于胰岛素不足或胰岛素的细胞代谢作用缺陷所引起的葡萄糖、蛋白质及脂质代谢紊乱的一种综合症。近年来，糖尿病患者的人数逐渐增多，分为I型糖尿病和II型糖尿病。其中II型糖尿病患者的人数占糖尿病总人数的85-90％，严重威胁着病人的健康和生命。如果糖尿病得不到良好的控制，可能引起很多并发症，例如：糖尿病肾病、视网膜病变、高血压等。

近期的研究表明在2型糖尿病的病发过程中，不断增长的β-细胞凋亡是导致β-细胞衰退和高血糖症发生的主要原因。目前，大多数患者通过口服降糖药物来帮助控制体内血糖，但是却无法提高β-细胞的活性，促进胰岛素的分泌，很多患者最终仍然要使用胰岛素治疗。

胰岛淀粉样变性与糖尿病之间存在联系。胰岛淀粉样多肽的纤维丝形成会通过细胞凋亡导致β-细胞死亡，淀粉样沉积可能直接会杀死细胞。抑制胰岛淀粉样多肽形成，可以减少胰岛淀粉样多肽对β-细胞的细胞毒性，促进胰岛素的分泌。因此，胰岛淀粉样多肽抑制认为是治疗糖尿病的靶点。尽管如此，并没有成熟开发的胰岛淀粉样多肽抑制剂问世，用于预防或治疗糖尿病。

发明内容：

本发明目的是针对现有降血糖的药物的特点，设计一种抑制剂2，能有效治疗糖尿病。

技术方案

一种胰岛淀粉样多肽抑制剂2，其序列为VLSVAALNHLDKATPIESH。所述抑制剂2的制备方法，其特征在于：采用Fmoc保护的固相合成技术制备，采用Fmoc保护的固相合成技术制备，Rink酰氨MBHA树脂和Fmoc-Gly-Wang树脂作为载体，6-氯-1-羟基苯并三氮唑和N,N-二异丙基碳二亚胺为缩合剂，三氟乙酸为切割试剂。所述抑制剂2在预防或治疗糖尿病及糖尿病并发症中的应用。所述的糖尿病并发症是糖尿病肾病、糖尿病高血压、糖尿病眼疾、糖尿病神经性病变。抑制剂2可通过多种给药方式预防或治疗糖尿病及糖尿病并发症，包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注，口服给药如药丸、胶囊等，鼻喷剂等。

有益结果：

本发明中的胰岛淀粉样多肽抑制剂2，可以靶向抑制胰岛淀粉样多肽形成，达到预防或治疗糖尿病的效果。更优选是治疗糖尿病和/或糖尿病并发症药物中的用途。所述的糖尿病包括I型糖尿病和II型糖尿病；所述的糖尿病并发症包括但不限于：糖尿病肾病、糖尿病高血压、糖尿病眼疾、糖尿病神经性病变等。

具体实施方式

实施例1

多肽的化学合成方法

抑制剂2用Fmoc保护的固相合成技术制备。合成反应按照抑制剂2序列从C端向N端进行，Rink酰氨MBHA树脂和Fmoc-Gly-Wang树脂作为载体(可在Advanced Chem Tech公司购得)上有自由氨基。每一步连接过程中，氨基酸残基都要活化，活化混合物中有4倍于载体上自由氨基的HBTU，HOBt，DIEA和Fmoc-氨基酸。用6-氯-1-羟基苯并三氮唑和N,N-二异丙基碳二亚胺为缩合剂，进行连接反应，每次氨基酸的连接反应之后，用吡啶/醋酸/N-甲基咪唑(4:1:0.5)的混合物来封闭未连接的自由氨基，封闭反应10分钟。下一个氨基酸连接之前，都要把载体上的Fmoc-基团去掉，去Fmoc-基团使用含20％哌啶的二甲基甲酰胺，需15分钟。最后，当所有氨基酸残基顺序连接之后，抑制剂2用98％三氟乙酸从载体上切割下来，切割在室温下进行2小时。

应用上述化学条件可合成并获得抑制剂2，序列为VLSVAALNHLDKATPIESH，该序列为全新序列。也可委托上海生工合成。

实施例2

胰岛淀粉样多肽抑制剂2的体外细胞凋亡的测定

本实验研究了胰岛素淀粉样多肽抑制剂2抑制胰岛瘤细胞(INS-1细胞)凋亡的作用。当细胞用10μmol/L胰岛素样淀粉多肽处理后，经TUNEL染色后发现与培养基对照组相比出现了很多绿色亮点，说明体系中存在凋亡的细胞。当20μmol/L胰岛素淀粉样多肽抑制剂2与胰岛素淀粉样多肽共孵育后，镜检看到比单纯加胰岛素样淀粉多肽的对照组较少的绿色亮点。对拍摄照片进行计数并统计后，发现用10μmol/L胰岛素样淀粉多肽处理的细胞凋亡率约为65.0％，而20μmol/L抑制剂2与胰岛素样淀粉多肽共同处理的细胞凋亡率减少到30.2％(p<0.05)。并且只用20μmol/L抑制剂2处理的细胞的凋亡情况与培养基对照组并无明显差别，说明抑制剂2显著减少了胰岛素样淀粉多肽诱导的细胞凋亡，但此浓度的抑制剂2自身对细胞没有毒性作用。