[发明专利]一种具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的汉麻籽粕多肽及其酶解制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物肽及其制备方法与应用，具体涉及一种具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的汉麻籽粕多肽及其酶解制备方法与应用。

背景技术

汉麻，又称火麻，在人类历史发展上发挥着重要的作用，是制造纸张、服装、绳索等的重要原料。汉麻籽是汉麻加工后的重要副产物，也是一种珍贵的药食同源物质，含有丰富的蛋白质、卵磷脂、亚麻酸、维生素以及钙、铁等人体必需的矿物质元素，是营养的重要来源；对便秘、高血脂、高血压、糖尿病及肠胃病等均有良好的预防作用，是长寿之乡——巴马县——百岁老人长期食用的“天然保健品”。

目前，我国大部分汉麻产区将汉麻籽作为油料，仅用于提取汉麻籽油，而含有丰富蛋白质、氨基酸的汉麻籽粕则被废弃为饲料和肥料，从而导致汉麻籽资源的浪费，汉麻籽粕没有得到充分利用。本发明采用可控酶解的方法，通过生物蛋白酶对汉麻籽粕蛋白进行酶解催化作用，有可能把其中所隐藏的抑制α-葡萄糖苷酶活性肽片段释放出来，从而制备具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的多肽。汉麻作为一种天然产物植物来源，来源广泛，如能提取出较高的α-葡萄糖苷酶抑制活性的多肽来降低部分人群体内的血糖含量，对于汉麻籽粕的废物利用以及丰富降血糖多肽资源、防治糖尿病及并发症具有广阔的市场经济效应。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的汉麻籽粕多肽及其酶解制备方法与应用。本发明方法能够实现原料的高效利用，具有高活性、高安全、简单可控、环境温和的制备特点。

本发明的目的由以下方案实现：

一种具有抑制α-葡萄糖苷酶活性的汉麻籽粕多肽的酶解制备方法，包括如下步骤：

(1)取汉麻籽粕干燥至含水量3％以下，粉碎成细粉；

(2)干粉与水的比例为5～20g：100mL，将汉麻籽粕溶液pH调至8.0～10.5，温度调至30～80℃，以100～300r/min的速度均匀搅拌0.5h～2h加速溶解，然后取上清液。将上清液pH调至3～6，离心，将沉淀冷冻干燥，制得汉麻籽粕蛋白。

(3)将汉麻籽粕蛋白加水溶解，汉麻籽粕蛋白与水的比例为2～7g：100mL，控制pH值在7.5～9.5，再加入碱性蛋白酶为生物催化剂，蛋白酶与全蝎蛋白重量之比：0.1～5：1000，反应温度为50～75℃，以100～300r/min匀速搅拌1～4h；煮沸10min，灭酶活，结束反应。10000r/min离心，收集上清液，干燥，得到粗多肽粉末。

(4)大孔吸附树脂装柱：根据层析柱体积称取适量填料DA201-C进行预处理，反复倾倒上清液除去悬浮破碎颗粒，将填料加入层析柱，层析柱规格2.6×30cm，待稳定后，用3倍柱体积去离子水洗脱液(条件与洗脱时的相同)冲柱。

(5)多肽粉加水溶解，倒入DA201-C大孔吸附树脂交换柱，以0～100％不同浓度乙醇溶液梯度洗脱，在波长214nm处测定吸光度，以吸收峰来分别收集洗脱液，目的在于将粗多肽分离纯化，去除色素及其它杂质，富集75％乙醇洗脱下来小肽组分，干燥得到多肽粉末。

(6)葡聚糖凝胶装柱：根据层析柱体积称取适量填料Sephadex G-15进行预处理，反复倾倒上清液除去悬浮破碎颗粒，将填料加入层析柱，层析柱规格1.5×80cm，待稳定后，用3倍柱体积去离子水洗脱液(条件与洗脱时的相同)冲柱。

(7)多肽粉加水溶解，倒入Sephadex G-15葡聚糖凝胶柱，以去离子水洗脱，在波长214nm处测定吸光度，以吸收峰来分别收集洗脱液，目的在于将粗多肽进一步分离纯化，去除低活性肽，富集高活性的小肽组分，浓缩，干燥，得汉麻籽粕多肽粉末。

(8)汉麻籽粕多肽的α-葡萄糖苷酶抑制活性指标评价。采用α-葡萄糖苷酶抑制活性对多肽的降血糖进行体外活性评价。

优选地，所述的汉麻品种为汉麻Cannabis sativa L.。

优选地，所述碱性蛋白酶为Alcalase2.4L，酶的活力为393235U/g。

优选地，步骤(2)和步骤(3)中所述pH调至8.0～10.5，控制pH值在7.5～9.5具体为：用0.1～2.0mol/L的氢氧化钠(NaOH)溶液将pH调至所需pH值；所述将pH调至3～6，具体为：用0.1～2.0mol/L的盐酸(HCl)溶液将pH调至所需值。

优选地，汉麻籽粕蛋白重量与碱性蛋白酶酶活之比0.1～5：1000，优选0.2～4：1000。