[发明专利]一种利用扩增DNA片段长度多态性测定短链RNA的方法

权利要求书

1.一种利用扩增DNA片段长度多态性定量测定短链RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

首先利用至少两种与待测短链RNA相比无天然同源序列的合成小RNA作为测定的内标，将这些作为内标的所述合成小RNA以不同分子数混合，形成动态小RNA标准分子梯度；

再以等量的所述动态小RNA标准与所述待测短链RNA混合，经由RNA反转录、cDNA加尾、PCR同步扩增及PCR产物DNA长度多态性片段的荧光定量分析,测得所述待测短链RNA扩增产生的DNA片段荧光强度在所述动态小RNA标准荧光强度梯度上的相对比例，从而实现所述待测短链RNA的相对定量。

2.如权利要求1所述的一种利用扩增DNA片段长度多态性定量测定miRNA的方法，其特征在于，测得所述待测短链RNA在所述动态小RNA标准梯度上的相对强度比例后，以待测短链RNA序列为模板合成短链RNA参照物，测定不同分子数量的待测RNA参照物在上述动态小RNA标准梯度上的相对比例，由此获得待测短链RNA参照物的分子数目-相对强度的校正曲线，再利用所述待测短链RNA相对强度比例通过所述校正曲线，计算出样品中待测短链RNA的绝对分子数量。

3.如权利要求1或2所述的一种利用扩增DNA片段长度多态性定量测定短链RNA的方法，其特征在于，所述待测短链RNA为miRNA或siRNA。

4.如权利要求1或2所述的一种利用扩增DNA片段长度多态性定量测定短链RNA的方法，其特征在于，所述RNA反转录过程中，所采用的引物为欧米茄引物。

5.如权利要求1或2所述的一种利用扩增DNA片段长度多态性定量测定短链RNA的方法，其特征在于，所述RNA反转录过程中，所采用的引物为茎环引物。

6.如权利要求5所述的一种利用扩增DNA片段长度多态性定量测定短链RNA的方法，其特征在于，所述茎环引物为经过长度编码的茎环引物。

7.如权利要求6所述的一种利用扩增DNA片段长度多态性定量测定短链RNA的方法，其特征在于，所述长度编码的方法为：在所述茎环引物的PCR靶位点与探针序列之间加上不同碱基数目，并调整引物5’端的碱基序列使之维持茎环的二级结构不变。

8.如权利要求2所述的一种利用扩增DNA片段长度多态性定量测定短链RNA的方法，其特征在于，所述校正曲线符合对数回归的方式，表述为：aX^b，其中a、b为常数项，经对不同分子数目的所述合成小RNA的实际测定值而确定。

9.如权利要求1所述的一种利用扩增DNA片段长度多态性定量测定短链RNA的方法，其特征在于，所述与待测短链RNA相比无天然同源序列的合成小RNA的种数为三种。