[发明专利]一株快速发酵面包酵母菌株及其构建方法有效
| 申请号： | 201410333534.6 | 申请日： | 2014-07-14 |
| 公开（公告）号： | CN104073449A | 公开（公告）日： | 2014-10-01 |
| 发明（设计）人： | 张翠英;肖冬光;林雪;董健;柏晓雯;宋海岩 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;A21D8/04;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京鼎佳达知识产权代理事务所(普通合伙) 11348 | 代理人： | 王伟锋 |
| 地址： | 300457 天津市滨*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 快速 发酵 面包 酵母 菌株 及其 构建 方法 | ||
1.一株快速发酵面包酵母菌株，是在酵母出发菌株中完全敲除葡萄糖磷酸变位酶基因PGM2的同时过表达H/ACA小核仁RNA的编码基因SNR84获得。
2.如权利要求1所述的一株快速发酵面包酵母菌株，其特征在于，所述出发菌株为面包酵母(Saccharomyces cerevisiae)CICC31616。
3.如权利要求1所述的一株快速发酵面包酵母菌株，其特征在于，所述PGM2基因其Gene ID为：855131，核苷酸序列如核苷酸序列表中SEQ NO:1所示；所述SNR84基因其Gene ID为：9164879，核苷酸序列如核苷酸序列表中SEQ NO:2所示。
4.一株快速发酵面包酵母菌株的制备方法，包括以下步骤：
(1)PGM2基因的敲除
①以质粒pUC6为模板，PCR扩增KanMX基因；
②将步骤(1)-①得到的PCR产物导入酵母出发菌株中，获得KanMX替代敲除PGM2的重组菌株1；
③用pGAP质粒去除步骤(1)-②获得菌株中的KanMX，获得完全敲除PGM2的重组菌株2；
(2)SNR84基因的过表达
①以面包酵母CICC31616总DNA为模板，PCR扩增SNR84基因；
②将步骤(2)-①得到的PCR产物连接到含有PGK1强启动子的质粒上，获得表达质粒1；
③以表达质粒1为模板，通过PCR扩增获得SNR84基因和强启动子的连接片段；
④将步骤(2)-③获得的片段连接到带有KanMX抗性的载体上，得到表达质粒2；
⑤将步骤(2)-④获得的表达质粒2导入步骤(1)-③的重组菌株2中，获得完全敲除PGM2同时过表达SNR84的重组菌株。
5.如权利要求4所述的一株快速发酵面包酵母菌株的制备方法，其特征在于，所述出发菌株为面包酵母(Saccharomyces cerevisiae)CICC31616。
6.如权利要求4所述的一株快速发酵面包酵母菌株的制备方法，其特征在于，所述含有PGK1强启动子的质粒为pUC质粒。
7.如权利要求4所述的一株快速发酵面包酵母菌株的制备方法，其特征在于，所述带有KanMX抗性的载体为Yep352载体。
8.如权利要求4所述的一株快速发酵面包酵母菌株的制备方法，其特征在于，所述基因片段和表达质粒导入酵母菌株的方法为醋酸锂转化法。
9.如权利要求1所述的快速发酵面包酵母菌株在快速发酵面包生产中的应用。
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