[发明专利]RCA报告探针及其用于检测核酸分子的用途

权利要求书

1.一种用于检测样品中的靶分析物的探针，其中所述探针提供或能够提供足以启动滚环扩增(RCA)反应的核酸组分，所述探针是核酸构建体，其包含：

(i)能够结合于所述靶分析物或直接或间接地结合于所述靶分析物的中间分子的一个或多个靶结合域；

(ii)一起包含或能够提供环状或可环化的RCA模板的一个或多个域；

(iii)包含或能够提供用于所述RCA反应的引物的域，所述域与所述环状或可环化的RCA模板的区杂交；以及，当所述探针包含或能够提供可环化的RCA模板时，

(iv)包含或能够提供作为所述可环化的RCA模板的连接的模板的连接模板的一个或多个域，

其中所述探针的至少部分必须被切割和/或解折叠来释放使所述滚环扩增反应能够实现的所述引物。

2.根据权利要求1所述的探针，其中所述探针包含：

(i)各自包含能够结合于所述靶分析物或直接或间接地结合于所述靶核酸分子的中间分子的靶结合域的至少两个域；

(ii)一个或多个一起能够提供RCA模板的域；和

(iii)至少一个能够提供引物和任选的连接模板的域，所述域包含：

(a)与所述探针内的序列互补以使其形成包含切割识别位点的发夹结构的部分的区；或

(b)包含切割识别位点的双链核酸的区，

其中

(1)能够提供RCA核酸组分的每个域经由靶结合域直接或间接附着于所述靶分析物；

(2)能够提供所述RCA模板的域与能够提供所述连接模板的域相邻；并且

(3)所述探针的切割释放所述RCA核酸组分以使得当所述靶结合域结合于所述靶分析物或中间分子时能够实现RCA反应。

3.根据权利要求1或2所述的探针，其中所述靶结合域的至少一个包含与靶核酸分子或直接或间接结合于所述靶分析物的中间核酸分子互补的区。

4.根据权利要求3所述的探针，其中所述靶核酸分子是所述靶分析物或所述靶分析物的标志物。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的探针，其中所述靶结合域是与所述靶或中间核酸分子杂交以使所述探针的5'和3'末端可直接或间接连接的核酸域。

6.根据权利要求1或2所述的探针，其中所述探针包含偶联于一个或多个分析物结合域以形成所述靶结合域的核酸分子。

7.根据权利要求6所述的探针，其中所述分析物结合域选自蛋白质，诸如单克隆或多克隆抗体、外源凝集素、可溶性细胞表面受体、来自噬菌体展示或核糖体展示的组合衍生的蛋白质、肽、碳水化合物、核酸适体或其组合。

8.根据权利要求7所述的探针，其中所述分析物结合域为抗体或其衍生物或片段。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的探针，其中所述一起能够提供RCA模板的一个或多个域的至少一个包含与所述探针内的序列互补以使其形成包含切割识别位点的发夹结构的部分的区。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的探针，其中将所述连接模板和引物域作为单独的域提供。

11.根据权利要求1至9中任一项所述的探针，其中所述引物域和连接模板由所述探针的相同部分提供。

12.根据权利要求10所述的探针，其中每一种RCA核酸组分由单独的域提供，并且其中能够提供连接模板和引物的域包含：

(a)与所述探针内的序列互补以使其形成包含切割识别位点的发夹结构的部分的区；或

(b)包含切割识别位点的双链核酸的区。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的探针，其中所述探针包含含有至少两个发夹结构的单链核酸分子。