[发明专利]邻苯二甲酸酯类总量ELISA酶联免疫检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种邻苯二甲酸酯类总量ELISA酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下组分：

（1）包被有邻苯二甲酸抗原的酶标板；

（2）邻苯二甲酸抗体工作液；

（3）辣根过氧化物酶标记的二抗；

（4）邻苯二甲酸标准溶液；

（5）底物液；

（6）底物缓冲液；

（7）反应终止液；

（8）浓缩洗涤液。

2.根据权利要求1所述邻苯二甲酸酯类总量ELISA酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的邻苯二甲酸抗原为半抗原4-氨基邻苯二甲酸与卵清蛋白的偶联物；

所述酶标板是96或40孔酶标板，材质为聚苯乙烯，包被有邻苯二甲酸抗原，并封闭微孔表面未吸附邻苯二甲酸抗原的位点。

3.根据权利要求1所述邻苯二甲酸酯类总量ELISA酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的邻苯二甲酸抗体为邻苯二甲酸单克隆抗体或邻苯二甲酸兔多克隆抗体。

4.根据权利要求1所述邻苯二甲酸酯类总量ELISA酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的邻苯二甲酸标准溶液的浓度为1mg/mL，使用时用磷酸盐缓冲液将标准溶液稀释成邻苯二甲酸标准品溶液。

5.根据权利要求1所述邻苯二甲酸酯类总量ELISA酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述底物液为含有3,3,5,5－四甲基联苯胺或邻苯二胺的pH5.0磷酸柠檬酸缓冲溶液。

6.根据权利要求1所述邻苯二甲酸酯类总量ELISA酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述底物缓冲液为含有过氧化氢或过氧化脲的pH5.0的磷酸柠檬酸缓冲溶液。

7.根据权利要求1所述邻苯二甲酸酯类总量ELISA酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述反应终止液为1～2mol/L硫酸溶液或2mol/L氢氧化钠溶液。

8.根据权利要求1所述邻苯二甲酸酯类总量ELISA酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液为含有0.5～1.5%（v/v）吐温-20的磷酸盐缓冲液，浓缩洗涤液的pH值为7.4、浓度为0.1mol/L。

9.权利要求1～8任一所述邻苯二甲酸酯类总量ELISA酶联免疫检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.将试剂盒从冷藏环境中取出，置于室温平衡；

S2.将标准品或经过前处理的待测样品加入已经包被有邻苯二甲酸抗原的酶标板孔内，然后每孔加入抗体，轻拍混匀，孵育；

S3.用洗涤液进行洗涤；

S4.加入辣根过氧化物酶标记的二抗，轻拍混匀，孵育；

S5.用洗涤液进行洗涤；

S6.将底物缓冲液与底物液等体积混合得到显色液，在每孔加入显色液，轻拍混匀，避光孵育；

S7.每孔加入反应终止液，混合均匀，在波长450nm或492nm下，以空气为空白，测定各孔吸光值；

S8.检测结果处理与分析：确定样品中邻苯二甲酸的含量，根据邻苯二甲酸的含量计算样品中邻苯二甲酸酯类的总含量。

10.根据权利要求9所述邻苯二甲酸酯类总量ELISA酶联免疫检测试剂盒的使用方法，其特征在于，S2所述的前处理是指将待测样品中的邻苯二甲酸酯类物质转化为邻苯二甲酸。