[发明专利]一种用微生物发酵生产甲壳低聚糖的方法

权利要求书

1.用于发酵生产甲壳低聚糖的菌种，该菌为淡紫拟青霉菌（Paecilomvces lilacinus）三炬03菌株，菌种专利保藏号CCTCC NO:M2010165。

2.如权利要求1所述的菌种的用途，其用于发酵生产甲壳低聚糖。

3.一种用微生物发酵生产甲壳低聚糖的方法，包括如下步骤：

（1）原料配备：将新鲜的虾壳或蟹壳制成含原料2-5%重量比的发酵原液，并灭菌；

（2）菌种制备：将权利要求1中的菌种由斜面培养逐步转入种子罐培养；

（3）在灭菌后的发酵原液中添加2-10%体积比的种子罐培养液，发酵获得甲壳低聚糖发酵液；

（4）从甲壳低聚糖发酵液中分离提取甲壳低聚糖。

4.如权利要求3所述的一种用微生物发酵生产甲壳低聚糖的方法，其特征在于，步骤（1）包括：

a、原料的制备：新鲜的虾壳或蟹壳晒干，粉碎成120目的干粉备用；

b、发酵原液配制：以重量比2-5%的虾、蟹壳粉与水混合均匀，再加入0.01-0.1%蛋白胨、0.1-1%葡萄糖、0.1-1%磷酸二氢钾、0.05-0.5%硫酸镁，制成发酵原液；

c、发酵原液灭菌：采用蒸汽加热灭菌。

5.如权利要求3所述的一种用微生物发酵生产甲壳低聚糖的方法，其特征在于，步骤（2）包括：斜面保藏菌种→活化生产斜面→一级三角瓶扩培→二级三角瓶扩培→种子培养→成熟菌种，接种量为5%发酵液量逐级接种。

6.如权利要求3所述的一种用微生物发酵生产甲壳低聚糖的方法，其特征在于，步骤（3）包括：

a、接种发酵：往灭菌好的发酵液中接种入5%种子罐培养好的发酵菌，搅拌通风发酵，刚接种后通风量为1：0.25（v/v.min），在发酵的过程，根据OD值和二氧化碳的产生量，逐步增加通风量至1：0.35（v/v.min）；

b、加药调控：当OD值达到一定值时，添加入0.075%去氧胆酸钠，再经40min后，把通风量提高到1：0.55（v/v.min），并逐步提高发酵温度至31℃，在发酵过程定期测定几丁质酶活和还原糖含量，及甲壳低聚糖的生成量；

c、流加补料：当发酵液还原糖的含量达55mg/ml时，开始流加补料，补料成分为10%虾、蟹壳粉和0.1%硫酸镁混合悬浮液；把补料置于流加罐中，通入蒸汽升温至121℃，保温30分钟灭菌，冷却后备用，在发酵的中后期时，按5%的量分三次逐步流加入发酵罐；当还原糖的含量达120mg/ml时，流加入适量的吐温80，继续发酵到还原糖含量基本稳定时，为发酵结束；发酵结束时，把发酵液的温度冷却到18℃以下。

7.根据权利要求6所述的一种用微生物发酵生产甲壳低聚糖的方法，其特征在于：步骤b中，发酵液稀释10倍后，在波长为505nm下测定OD值，当OD值为0.4-0.45时，开始添加抑制剂0.075%去氧胆酸钠，来抑制菌丝的生长，使菌体内蛋白质的代谢平衡发生改变。

8.如权利要求3所述的一种用微生物发酵生产甲壳低聚糖的方法，其特征在于，步骤（4）包括：

a、离心去菌体：冷却后的发酵液，直接泵入离心机，在离心机5000rpm中，离心30分钟，获得上清液，把上清液泵入储罐中备用，抽样检测含甲壳低聚糖量；

b、膜过滤：把上清液经两道膜过滤获得较高浓度、较高纯度的甲壳低聚糖；或

c、真空浓缩：把上清液泵入双效蒸发浓缩罐中，进行真空浓缩，浓缩至浓缩液甲壳低聚糖含量在15～20%时，泵入储罐备用；

d、喷雾干燥：将步骤b或c的甲壳低聚糖浓缩液，采用喷雾干燥机，通过调节进料口温度为150℃，出料口温度70～75℃，进行喷雾干燥，制得甲壳低聚糖干燥粉产品。

9.如权利要求8所述的一种用微生物发酵生产甲壳低聚糖的方法，其特征在于，步骤（4）还包括：

e、产品精制：通过2倍的食用乙醇进行纯化，获得99%含量甲壳低聚糖产品，完全水溶。