[发明专利]一种路邓葡萄球菌选择性培养基的制备方法

说明书

技术领域

本发明为申请日为2013年1月13日，申请号为2013100107396，名称为《一种路邓葡萄球菌选择性培养基及其制备方法》的发明专利的分案。本发明涉及医学检验领域，具体涉及一种路邓葡萄球菌选择性培养基的制备方法。

背景技术

路邓葡萄球菌，由Freney等于1988年首次报道。近年来，路邓葡萄球菌引起的侵袭性感染的报道日趋增多。它作为具有显著临床微生物学特征的致病菌引起学者广泛关注，更有学者将其称为Surreptitious Staphylococcus或 “披着羊皮的狼”。路邓葡萄球菌与多种临床疾病密切相关，包括脓肿、心内膜炎、腹膜炎、泌尿道感染、中枢神经系统感染、骨关节感染等。

由于路邓葡萄球菌为人体皮肤的正常菌群，采血操作消毒不彻底的话，路邓葡萄球菌很容易混入血液中，造成血液污染而传播疾病。故而，高效、可靠的路邓葡萄球菌培养是用于研究、鉴定该菌种的基础。

由于既往路邓葡萄球菌常被作为培养污染菌，因此目前尚缺乏用于路邓葡萄球菌选择性培养的培养基。

发明内容

本发明的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种对路邓葡萄球菌分离率高的选择性培养基。

本发明解决其技术问题的技术方案是：一种路邓葡萄球菌选择性培养基，其特征在，配制1000ml选择性培养基的配方中含有：麦芽浸粉15g；鸡蛋蛋白液150ml；氯化钠5g；枸橼酸镁0.5g；琼脂15g；假细锥甲素8~12mg；6-O-乙酰黄豆苷 0.03g；磷酸二氢钾0.2g；硫酸铜6mg；L-半胱氨酸0.1g；浓度200g/L的山药水煮液200~300ml；蒸馏水加至1000ml。

一种路邓葡萄球菌选择性培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）取山药加水煮沸1小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得山药水煮液；

（2）取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化钠；枸橼酸镁；琼脂；假细锥甲素；6-O-乙酰黄豆苷；磷酸二氢钾；L-半胱氨酸及硫酸铜溶于步骤1所得山药水煮液中，混匀过滤后，蒸馏水定容，低温灭菌2次，每次45 min，灭菌后分装。

其中所述的麦芽浸粉、鸡蛋蛋白液提供碳氮源和能量；枸橼酸镁和磷酸二氢钾为缓冲剂，并可以抑制杂菌生长；L-半胱氨酸属氨基酸类，为营养剂；琼脂是选择性培养基的凝固剂；假细锥甲素对于金葡菌具有特异的抑菌作用，对于路邓葡萄球菌无效；鸡蛋蛋白液含有各种多肽、脂肪、生长因子、激素等，这些物质对促进路邓葡萄球菌的繁殖和生长都是很重要的因素，此外鸡蛋蛋白液还具有维持选择性培养基pH 值恒定的作用。6-O-乙酰黄豆苷为针对路邓葡萄球菌的特异性营养剂，可以特异性的增加路邓葡萄球菌繁殖速度。铜离子属于重金属离子，在6mg/L这个浓度剂量下，铜离子沉积于金葡菌内部，导致胞壁消失或变薄，核糖体聚集成团块，最终导致细菌变形及破裂，呈现重金属源性损伤，而路邓葡萄球菌对重金属的运输能力和渗透能力低于金葡菌，也即重金属的抗性较高，即使6mg/L这个浓度也可以耐受，故而加入硫酸铜可以有效地抑制金葡菌生长。山药为为薯蓣科植物薯蓣Dioscorea opposita Thunb. 的干燥根茎，含有蛋白质、脂肪、淀粉、还元糖、氨基酸等多种成分，可以提供能量代谢、细胞发育、新陈代谢因子，尤其是山药块茎含薯蓣皂甙元（diosgenin）和多酚氧化酶，有助于促进路邓葡萄球菌生长，尤其是重金属环境下菌落的生长。

本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、路邓葡萄球菌分离率高的特点。

具体实施方式

以下结合实际情况，对本发明的具体实施方式作详细说明。

实施例1，配制1000ml选择性培养基的配方中含有：麦芽浸粉15g；鸡蛋蛋白液150ml；氯化钠5g；枸橼酸镁0.5g；琼脂15g；假细锥甲素8mg；6-O-乙酰黄豆苷 0.03g；磷酸二氢钾0.2g；蒸馏水加至1000ml。制备方法：取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化钠；枸橼酸镁；琼脂；假细锥甲素；6-O-乙酰黄豆苷；磷酸二氢钾溶于蒸馏水中，混匀过滤后，蒸馏水定容，低温灭菌2次，每次45 min，灭菌后分装。