[发明专利]白首乌磷脂的酪氨酸酶抑制活性及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种白首乌磷脂的酪氨酸酶抑制活性及其用途。本发明涉及从中药白首乌中提取、分离得到的总磷脂具有抑制酪氨酸酶的活性，阐明了其制备方法及其食品、日用化工领域的新用途。

背景技术

酪氨酸酶是一种含铜的多酚氧化酶，它是生物体黑素合成过程中的限速酶，催化酪氨酸羟化为多巴、多巴氧化为多巴醌以及5，6-二羟基吲哚(DHI)氧化为5，6-吲哚醌三个步骤。其表达和活性决定着黑色素生成的量和速度。反应过强可引起黑素过多症，如雀斑、黄褐斑等，黑色素生成过多是黄褐斑形成的根本原因；反应过弱或缺乏反应，则可引发白发、白癜风等。它的活性决定着黑色素的合成及合成量的多少，控制其活力即可控制黑色素的生成量，从而治疗色素沉着性疾病或在化妆品领域用于皮肤防晒、增白、祛斑。另外，食品加工与储藏过程中经常会发生酶促褐变等变色现象，引起褐变的酶主要就是酪氨酸酶，绝大多数褐变影响食品加工与储藏的效果和质量的稳定，尽可能降低酪氨酸酶的活性有助于改善食品褐变现象。

白首乌来源于萝摩科鹅绒藤属3种植物【分别为耳叶牛皮消(Cynanchum auriculatum Royle ex Wight)、戟叶牛皮消(Cynanchum bungei Decne)和隔山消(Cynanchum wifordii Hemsl)】的块根，是临床常用的补益和抗衰老中药，自古以来就被视为摄生防老、益精养颜的珍品。现代研究发现白首乌中含有多种活性成分，如C₂₁甾苷、多糖、磷脂等。研究报道白首乌总磷脂可促进家兔耳毛生长【吴秉芹，傅骥远，龚树生，等.白首乌总磷脂促进家兔耳毛生长的研究[J].中国医药学报，1987，2(3)：29-31.】，公开号为CN1876003A的专利申请“白首乌有效部位的制备方法及其在治疗失眠药物中的用途”公开了白首乌磷脂和白首乌多糖的提取工艺及其在治疗失眠药物和治疗或改善失眠的食品中的用途，但目前尚无白首乌药材中提取的磷脂具有抑制酪氨酸酶的活性及其相关用途的报道。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种白首乌总磷脂的新用途。本发明白首乌总磷脂有显著的酪氨酸酶抑制活性，可用于制备预防皮肤晒黑、增白、祛斑的保健食品及化妆品，也可用于制备护色剂以防止食品褐变。本发明通过以下技术方案实现：

所述白首乌总磷脂是这样制备的：白首乌粉用Folch试剂(氯仿∶甲醇为2∶1)800mL经回流4h，过滤后滤渣重复提取两次，提取液浓缩至干，并用适量氯仿溶解，经5倍石油醚沉淀甾体类化合物，离心分离得到的上清液通过减压浓缩挥干溶剂后，得到总磷脂。

白首乌总磷脂影响酪氨酸酶活力检测方法：取适量白首乌总磷脂，用溶剂(丙二醇∶乙酸乙酯∶磷酸盐缓冲液体积比＝9∶1∶18)溶解配制成浓度为1mg/mL(在反应体系的终浓度为0.2mg/mL)的溶液，通过酶促反应检测其对酪氨酸酶二酚酶活力的影响。取适量氢醌溶于磷酸盐缓冲液中制得浓度1mg/mL溶液，作为阳性对照溶液。取待测物溶液50μL，并用pH6.8磷酸盐缓冲液适量稀释至140μL，与酪氨酸酶液(25U/mL)50μL混合，于37℃孵育5min，加入15mmol/L的左旋多巴溶液60μL，继续孵育2min，立即于酶标仪492nm处测光吸收值并计算酪氨酸酶抑制率。白首乌总磷脂对酪氨酸酶活力的抑制率为18.6％，而作为阳性对照物氢醌在同样浓度时的抑制率为69.2％。说明在终浓度为0.2mg/mL时，白首乌总磷脂对酪氨酸酶有一定抑制作用，但抑制作用不及氢醌。

本发明提供的白首乌总磷脂可以作为活性成分，加入食品工业允许添加的成分制备预防皮肤晒黑、增白、祛斑的保健食品，如冲调膏、口服液、软胶囊、口服片等。

本发明提供的白首乌总磷脂用于制备防晒、增白、祛斑化妆品在配方上没有特别的限制，可以作为活性成分而制成防晒乳、润肤霜、按摩霜、面膜、凝胶、身体护理乳液、身体护理油和身体护理精华等。当它作为主要的基质材料用于化妆品时，可以不用添加油脂类材料而起到良好的润肤效果，同时在皮肤的表面还能形成一层有光泽的保护膜，是一种极其安全的化妆品基质材料。

本发明提供的白首乌总磷脂还可用于制备护色剂以防止食品褐变，护色剂可以是白首乌磷脂的油溶液、油膏，也可以白首乌磷脂为主，添加一些有助于护色的安全无毒害的物质。