[发明专利]一种蛋清源抗氧化肽粉及其制备方法

权利要求书

1.一种蛋清源抗氧化肽粉，其特征在于，分子量为300～600Da，蛋白质含量为94.28%，DPPH清除率为90.2%，还原力为1.8，含水量为1%～3%。

2.一种权利要求1的蛋清源抗氧化肽粉的制备方法，其特征在于，以蛋清蛋白酶解液为原料，经过超滤、真空旋转浓缩、柱层析分离、真空冷冻干燥的工艺过程，制得分子量为300～600Da，蛋白质含量为94.28%，DPPH清除率为90.2%，还原力为1.8，含水量为1%～3%的蛋清源抗氧化肽粉；

1）所述的超滤过程，是指将pH为7.0、DPPH清除率为50%、还原力为1.46的蛋清蛋白酶解液，依次泵入超滤装置中的30kDa、10kDa、3kDa和1kDa的超滤膜，且超滤过程中要求膜通量3.5～8L/m²·h、控制温度为10～30℃、回流阀压力0～20psi，最后收集1kDa超滤膜的膜下液，即为分子量小于1kDa的超滤液，置于4℃冰箱内备用；

2）所述的真空旋转浓缩过程，是指将分子量小于1kDa的超滤液，用真空旋转浓缩仪进行浓缩处理，要求控制转速为1000～1500rpm，浓缩温度为50～70℃，浓缩至初始体积的1/5～1/10，获得蛋白质浓度为60%～80%的浓缩液；

3）所述的柱层析分离过程，是指将浓缩液，选用Sephadex G-25或G-15凝胶柱层析进行分离，包括层析柱的装配、上样、洗脱、收集的过程；

所述的层析柱装配过程，是指称取Sephadex G-25或G-15凝胶10～40g置于烧杯中，加入150～500mL蒸馏水，于沸水浴中煮沸溶胀1～2h后反复洗涤，选取径高比为1/100～13/300的层析柱，垂直固定于4～6℃恒温柜中，自顶端沿柱壁缓慢、匀速加入充分溶胀、均一、无杂质的凝胶，待凝胶沉积至离层析柱顶约3～8cm时，缓慢泵入蒸馏水，使层析柱床稳定，保证柱床均一，无气泡，将层析柱下端出口与紫外检测器连接，调节紫外检测器的波长范围为220～280nm，灵敏度为0.1～0.5；

所述的上样过程，是指按照浓缩液与水的体积比为1:50～1:5混合，经0.45μm膜过滤后，取1～5mL缓缓地滴加到层析床表面，待层析柱床表面恰好露出时，加入1mL蒸馏水洗涤，让洗涤液进入层析柱床内后再注满蒸馏水，封闭层析柱，准备洗脱；

所述的洗脱过程，是指通过调节恒流泵工作状态，控制水在柱层析系统中的恒流速度范围为0.5～2mL/min；

所述的收集过程，是指自洗脱开始40～90min后开始收集洗脱液，收集60～150min；

4）所述的真空冷冻干燥过程，是指将多次同一时间洗脱液合并于一个干燥盘中，置于预冻温度为-85℃～-80℃冷冻库中，预冻5～6h后，移至真空冷冻干燥机中，温度设定为-57℃～-55℃，冻干时间为24～27h，获得分子量为300～600Da，蛋白质含量为94.28%，DPPH清除率为90.2%，还原力为1.8，含水量为1%～3%。

3.根据权利要求2所述的蛋清源抗氧化肽粉的制备方法，其特征在于，所述的超滤过程，是将pH为7.0、DPPH清除率为50%、还原力为1.46的蛋清蛋白酶解液，依次泵入超滤装置中的30kDa、10kDa、3kDa和1kDa的超滤膜，且超滤过程中要求膜通量3.5～8L/m²·h、控制温度为10～30℃、回流阀压力0～20psi，最后收集1kDa超滤膜的膜下液，即为分子量小于1kDa的超滤液，置于4℃冰箱内备用。

4.根据权利要求2所述的蛋清源抗氧化肽粉的制备方法，其特征在于，所述的真空旋转浓缩过程，是指将分子量小于1kDa的超滤液，用真空旋转浓缩仪进行浓缩处理，要求控制转速为1000～1500rpm，浓缩温度为50～70℃，浓缩至初始体积的1/5～1/10，获得蛋白质浓度为60%～80%浓缩液。