[发明专利]一种Ezrin抗原决定簇多肽及其磷酸化Thr566抗体制备方法和采用该抗体制备的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种Ezrin抗原决定簇多肽及其磷酸化Thr566抗体制备方法和采用该抗体制备的试剂盒。

背景技术

Ezrin自1983年被Bretsher首先在鸡的小肠上皮细胞刷状缘中分离纯化出来。早期Ezfin的发现并未受到重视，但随着研究的深入。发现其在稳定细胞形态、辅助细胞运动、黏附、细胞信号传导和细胞凋亡等多项活动中发挥着重要的作用。目前许多研究均表明Ezfin与多种肿瘤的发生、发展，尤其与侵袭、转移及预后相关。Ezrin表达具有相对的组织和细胞特异性.在成人组织中分布于脑、肾、肠、肺、周围神经和施万细胞等，亚细胞定位于胞质膜、顶端的微绒毛、肌动蛋白包含的表面物质、细胞间的黏结点161。生理水平下，Ezrin在细胞中存在静止状态和激活状态两种，细胞内Ezrin多以静止的单体形式存在，分子内N端与C端直接进行自身分子内交联，形成头尾连接的折叠状态.产生一个闭合静止的构象，相互作用的N端与C端区域称为自身结合结构域，从而使Ezrin成为静止状态。目前认为主要是通过磷酸化与去磷酸化实现Ezrin的活化与静止的调节。活化的途径有两种：C端的苏氨酸磷酸化和N端与磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2)的结合。细胞内蛋白激酶(PTK和PSTK)和小G蛋白Rho等能使c端的苏氨酸566(Thr566)磷酸化，减弱C-N作用，打开Ezrin的空间构象，暴露出C端的肌动蛋白一细胞骨架结合位点，通过此结合位点的桥接作用.Ezrin将肌动蛋白丝与细胞膜相连。而N端则直接与PIP2连接而活化Ezrin，活化后的Ezrin可促进FERM区与黏附分子的连接，进而发挥功能。Fievet等研究发现Ezrin的N端与PIP2的连接可诱导Ezrin构象的改变，并将Ezrin锚定于细胞膜上，促使nlr567发生磷酸化。而去磷酸化则被认为可能是Ezrin失活的机制。

Ezrin是连接细胞膜和细胞骨架的桥接蛋白，主要出现在细胞的表面结构。通过不同的膜表面分子信号传导及跨膜信号传导途径，发挥不同的功能，参与细胞的生存、黏附、增殖、迁移等的过程。1.Ezrin与细胞形态的调节活化后的Ezrin优先分布于细胞的表面突出，如微绒毛、丝状伪足、微小突起、局部的黏附物和膜皱褶，以维持正常的细胞形态以及细胞的极性。2.Ezrin与细胞间、细胞一基质间的黏着和细胞的运动Ezrin可与CD44、E-cadhefin、ICAM-1、ICAM-2等多种黏附分子共表达，通过调节肌动蛋白的组装和收缩，调节细胞与细胞之间、细胞与基质之间的黏附和运动。3.Ezrin与细胞信号传导、细胞周期的调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)/蛋白质丝、苏氨酸激酶(Akt)通路的信号传导能诱导细胞凋亡，而激活此通道的前提是Ezrin353位的酪氨酸磷酸化被苯丙氨酸代替。Ezrin的活化能稳定活化的AKT在细胞膜上的位置，增强其活性，活化的AKT能保护细胞减少坏死。Fas死亡受体途径是主要的细胞凋亡信号传导途径，Fas介导的凋亡并不总是依赖Fas在细胞表面的表达，而是通过Fas与Ezfin直接相连，连接细胞膜与细胞骨架，作为一个整体介导细胞的凋亡。另外.Ezrin在细胞因子作用下参与调控细胞的增殖，Kishore等研究发现TNF可诱导Rho激酶介导的Ezrin磷酸化。Ezrin在细胞中发挥着多种生物学功能，而其表达与恶性肿瘤的关系也密切，但目前的研究仍在某些方面存在争议.有必要改进实验手段及检测方法，并明确统一的定量标准.以便更好地分析Ezfin的表达与恶性肿瘤的关系。Ezfin如何在恶性肿瘤中发挥作用的机制仍未明确。随着研究的深入，Ezrin有望能成为治疗癌症的又一靶点。Ezrin蛋白在肿瘤细胞转移过程中发挥重要作用，Ezrin蛋白高表达与肿瘤恶性程度、转移能力密切相关。

发明内容

本发明提供一种Ezrin抗原决定簇多肽及其磷酸化Thr566抗体制备方法和采用该抗体制备的试剂盒。

10    20    30    40    50    60

MPKPINVRVT TMDAELEFAI QPNTTGKQLF DQVVKTIGLR

EVWYFGLHYV DNKGFPTWLK

70    80    90    100    110    120

LDKKVSAQEV RKENPLQFKF RAKFYPEDVA EELIQDITQK

LFFLQVKEGI LSDEIYCPPE

130    140    150    160    170    180