[发明专利]茄子EST-SSR标记的开发及应用方法

权利要求书

1.一种茄子EST-SSR标记的开发及应用方法，其特征在于，具体按照以下步骤完成：

1）从NCBI数据库中获得EST序列，对所获得的EST序列进行处理并检测该EST序列中的SSR；

2）设计SSR标记的引物序列；

3）从田间获取如表1所示的编号1-48的茄子材料和茄子F₂群体的植株的嫩绿叶片，提取其总DNA；

4）用步骤2）所设计的SSR标记的引物序列扩增步骤3）中表1所示的编号1-12的茄子材料；

5）获得在步骤3）中表1所示的编号7-12的茄子材料中有差异的EST-SSR标记，其序列如序列表所示；

6）用步骤5）所获得的EST-SSR标记扩增步骤3）中表1所示的编号13-48的茄子材料和F₂群体；

7）计算每对引物的多态性信息含量并对步骤3）中表1所示的编号13-48的茄子材料进行遗传多样性的聚类分析；

8）对步骤6）所获得的F₂群体扩增的标记进行连锁作图和茄子果实性状的QTL定位。

2.根据权利要求1所述的茄子EST-SSR标记的开发及应用方法，其特征在于，步骤3）中所述的提取总DNA的具体方法步骤如下：

1）将100-200mg所述嫩绿叶片的冻叶或鲜叶放入预冷的研钵中，加入液氮研磨，将研磨的粉末转入2ml离心管中，加入800ul新鲜配制的提取缓冲液，涡旋混匀，冰浴保存10min，10000rpm、4℃离心15min，弃上清；

2）于沉淀中加入700ul65℃预热的裂解缓冲液，并用牙签搅松，涡旋混匀，65℃水浴30min；

3）加入750ul的氯仿∶异戊醇为24：1的混合液，翻转50次以上，10000rpm、4℃离心15min，将上清转入2ml的离心管中；

4）加入750ul的氯仿∶异戊醇为24：1的混合液，翻转50次以上，10000rpm、4℃离心15min，将上清转入1.5ml的离心管中；

5）加0.1体积pH5.2的3M醋酸钠，加等体积的异丙醇后翻转30次，放置30min，10000rpm离心5min，弃上清液，加700ul70%乙醇洗DNA小团，10000rpm、4℃离心10min，倒掉上清液，通风干燥20min；

6）加200μl的TE缓冲液4℃，30min以上溶解DNA，并保存。