[发明专利]一种草莓镶脉病毒抗体及其抗原多肽、免疫原和应用

说明书

技术领域

本发明属于病毒免疫学检测及技术领域，尤其涉及一种草莓镶脉病毒抗体及其抗原多肽、免疫原和应用。

背景技术

草莓长期靠匍匐茎繁殖，易形成病毒病感染。多表现为斑驳、黄边、皱叶、镶脉等类型。草莓病毒病给草莓生产造成严重的经济损失，一般可使草莓减产高达20％～30％，并且使浆果的质量下降，果实变小，商品性变差。

草莓镶脉病病毒英文名称为Strawberry vein banding virus，简称SVBV，SVBV分类上属花椰菜花叶病毒科、花椰菜花叶病毒属，是一种粒子等轴状的双链DN病毒。它是我国草莓主栽区的主要感染病毒之一，单独侵染时症状不明显，复合侵染后叶脉皱缩，叶片扭曲，同时沿叶脉形成黄白色或紫色病斑，植株极度矮化，匍匐茎发生减少。SVBV以半持久性方式通过蚜虫或嫁接传播，在栽培品种上的带毒率可达21％，已成为危害我国草莓生产的4中主要病毒之一。

SVBV病毒粒子呈球形，大小约45-50nm。基因组长度约为8kb，包括7个基因开放阅读框(ORF)，其中ORF IV编码外壳蛋白，Pappu等和隋春都对SVBV的外壳蛋白设计PCR引物，检测了不同地区草莓中的SVBV，结果表明外壳蛋白在SVBV中的保守性较好，不同地区中SVBV病毒的外壳蛋白基因仅存在个别位点的变异。

目前对草莓镶脉病毒的鉴定方法有病毒指示植物鉴定法、电子显微镜镜检法和多聚酶链式反应(PCR)技术等，但上述方法通常实验耗时长，步骤复杂，同时检测需要配备昂贵的检测仪器，难以得到大范围的应用和推广。

胶体金试纸检测技术是一项近年快速发展的高通量技术，它的原理是植物汁液(由加样孔滴入)，经样品垫过滤处理后，样品病毒蛋白与标记物垫上的显色标记物发生免疫反应，然后层析到测试线(T线)发生特异性免疫反应，根据是否显色来判断样品是否感染病毒；未反应的显色标记蛋白复合物与控制线(C线)反应显色，确认试纸有效，残液被吸水垫吸收。反应实质为特异性免疫结合反应，胶体金(红色)为反应指示物。

胶体金免疫层析试纸条最大的优点在于检测成本低，操作极为简便，便于大规模推广。目前，国内已在玉米细菌性枯萎病、番茄环斑病毒、烟草环斑病毒、马铃薯X病毒和Y病毒的检测中成功应用，并取得了很好的效果，但在草莓上还未见相关应用的报道，且没有相关的快速检测试剂的研发。

发明内容

本发明提供了一种抗原多肽，利用该抗原多肽获得的多克隆抗体能特异灵敏地识别草莓镶脉病毒(SVBV)。

一种抗原多肽，为多肽A或多肽B，其中多肽A的氨基酸序列如SEQID No.1所示，多肽B的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

所述抗原多肽是以草莓镶脉病毒的外壳蛋白为靶蛋白，根据该外壳蛋白上的两个抗原优势表位设计合成的。其中多肽A对应了SVBV外壳蛋白N端(2-15)区域，多肽B对应了SVBV外壳蛋白C端(455-468)区域。

本发明还提供了一种免疫原，由所述抗原多肽和与其偶联的载体蛋白组成。其中，所述载体蛋白可选牛血清白蛋白、血蓝蛋白或鸡卵白蛋白。优选牛血清白蛋白。

本发明还提供了一种草莓镶脉病毒抗体，为抗体A或抗体B，其中抗体A由含有多肽A的所述免疫原制备获得，抗体B由含有多肽B的所述免疫原制备获得。

将所述免疫原与佐剂混合并充分乳化后，进行动物免疫；获取免疫动物的抗血清，从抗血清中分离纯化获得所述草莓镶脉病毒抗体。该草莓镶脉病毒抗体能特异识别所述抗原多肽，即抗体A特异性识别多肽A，抗体B特异性识别多肽B。

获得所述草莓镶脉病毒抗体后，采用ELISA法测定其效价、反应特异性和敏感性。经间接ELISA检测，抗体A和抗体B都具有较好的特异性和灵敏度，因此可用于草莓镶脉病毒的检测。

从而，本发明提供了一种检测草莓镶脉病毒的试纸条，包括样品垫、标记物垫、反应膜和吸样垫，所述标记物垫包被有胶体金标记或酶标记的抗体A，所述反应膜包被有抗体B；或所述标记物垫包被有胶体金标记或酶标记的抗体B，所述反应膜包被有抗体A。

所述反应膜通常是硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；所述标记物垫通常是玻璃纤维膜。所述试纸条还可装入塑料卡中制成检测卡。由于抗体A和抗体B分别识别SVBV外壳蛋白的不同抗原决定簇，因此可通过双抗体夹心法，利用所述试纸条对SVBV进行检测。

本发明还提供了一种含有所述草莓镶脉病毒抗体的检测试剂盒。