[发明专利]一种野生嗜杀酿酒酵母的筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于食品发酵工业领域，特别是涉及一种野生嗜杀酿酒酵母的筛选方法。

背景技术

在此处键入背景技术描述段落。嗜杀酵母是指某些酵母在其生长繁殖过程中，能向菌体外分泌一种毒素蛋白的菌株，这种毒素蛋白能够杀死同一属的敏感菌株，较少情况下，也能杀死不同属的敏感菌株。嗜杀酵母分泌的毒素蛋白称为嗜杀毒素，嗜杀酵母对自身分泌的嗜杀毒素具有免疫力。在酿造过程中，防止野生酵母和细菌的侵染是至关重要的。在国外，人们已在清酒、葡萄酒、酒精发酵、啤酒生产中使用了嗜杀菌株。国内近年来也开展了嗜杀酿酒酵母方面的研究工作，并经过发酵试验证明可有效防止野生酵母的污染，对于保证果酒、酒精、啤酒纯种酿造及提高成品果酒、啤酒的生物稳定性具有明显效果，具有开发利用的潜在价值。

嗜杀酿酒酵母获得方法之一可以从野生菌株进行筛选，以获得高性能的嗜杀菌株。目前已存在的滴定法和交叉划线法可以进行嗜杀菌株的初步筛选。但由于操作方法的不确定性，无法体现待测菌液的量与嗜杀能力大小的关系。

发明内容

在此处键入发明内容描述段落。本发明的目的是针对传统筛选方法存在的诸多缺点，获得一种高效的可以相对比较酿酒酵母嗜杀能力大小的筛选方法。

本发明采取如下技术方案：

在麦芽汁平板培养基（含0.003%美兰）中添加敏感酿酒酵母菌株、最终浓度为10⁵cuf/ml，涂布均匀，将培养好的待测菌株稀释10倍，摇匀，用镊子夹取直径大约为5mm灭菌滤纸片，蘸取稀释菌液，以滤纸片全部被淹没为准，轻轻置于麦芽汁鉴定培养基上，25℃培养2d~3d后，若待测菌为嗜杀菌株，则在其周围会形成圆形蓝色的死菌带。可根据死菌带直径大小比较野生酿酒酵母嗜杀性能的高低。

具体实施方案

野生酿酒酵母菌增殖培养：采集400g市售葡萄样品，捣碎，置于无菌锥形瓶中，盖八层纱布于25℃～30℃下自然发酵2～3d。

野生酿酒酵母菌的分离：无菌条件下，将采集到的用于分离酵母菌的增殖培养液样品摇匀，用无菌移液管吸取适量发酵液于10°灭菌麦芽汁培养液中，25℃下培养5d。取培养液1ml梯度稀释至浓度为10^-4~10^-5，吸取0.1～0.2ml稀释液均匀涂布于麦芽汁平板培养基上，25℃下倒置48h,待长出菌落后，选择具有典型单菌落(酵母菌菌落)进一步划线纯化2-3次，单菌落分别转入麦芽汁固体斜面培养基上，4℃下低温保存。

野生酿酒酵母菌的筛选：在9cm麦芽汁平板培养基（含0.003%美兰）中添加敏感酿酒酵母菌株0.1～0.2ml，最终浓度为10⁵cuf/ml，涂布均匀；同时活化并培养待测菌株，菌液稀释10倍，摇匀，用镊子夹取直径大约为5mm灭菌滤纸片，蘸取稀释菌液，以滤纸片全部被淹没为准，轻轻置于麦芽汁鉴定培养基上，25℃培养2d~3d后，若待测菌为嗜杀菌株，则在其周围会形成圆形蓝色的死菌带。可根据死菌带直径大小比较野生酿酒酵母嗜杀性能的高低。