[发明专利]一种海参体壁总DNA提取方法

权利要求书

1.一种海参体壁总DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

（a）样品预处理：第一步是将海参的酒精保存样品用PBS溶液置换出酒精，或将海参干品用PBS溶液浸发，将第一步处理好的样品在高盐缓冲液中剪碎样品，然后固液分离，弃液相取剪碎的固体样品作为预处理后的样品；所述的高盐缓冲液为：200mmol/L Tris-HCl,50mmol/L EDTA,500mmol/L NaCl,0.2%β-巯基乙醇，余量为水，pH8.0；

（b）样品的裂解：将预处理后的样品加入到裂解液中，再加入适量的蛋白酶K降解蛋白质，65℃消化30~60min，每隔5~10min混匀一次，待样品消化彻底后，12000g/min离心2~3min，上层形成一层悬浮粘稠物，取下层澄清的样品消化液；所述的裂解液为100mmol/LTris-HCl，20mmol/L EDTA，1.4mol/L NaCl，2%CTAB，1%PVP，1%SDS，0.2%β-巯基乙醇，余量为水；

（c）样品消化液用氯仿：异戊醇抽提，含有DNA的水相加入等体积的异丙醇高盐溶液，-20℃下放置20min，12000-13000g/min离心12-15min，弃上清，取DNA沉淀；所述的异丙醇高盐溶液是由异丙醇和5mol/L NaCl按体积比3：1混合而成；

（d）用体积分数70%乙醇水溶液的洗涤DNA沉淀，然后12000-13000g/min离心3-5min，弃上清；重复操作2-3次，将DNA沉淀干燥，再用0.1×TE溶液充分溶解保存。

2.根据权利要求1所述的海参体壁总DNA提取方法，其特征在于，所述的步骤（a）的将海参的酒精保存样品用PBS溶液置换出酒精是取海参的酒精保存样品在PBS溶液中放置3-6min，期间更换PBS溶液2次；所述的步骤（a）的将海参干品用PBS溶液浸发是将海参干品在PBS溶液放置30-60min，期间更换PBS溶液2次；所述的步骤（a）的固液分离是在10000-12000g/min离心1-2min，弃上清液；重复操作2次。

3.根据权利要求1所述的海参体壁总DNA提取方法，其特征在于，所述的步骤（c）的样品消化液用氯仿：异戊醇抽提是将样品消化液中加入等体积的体积比为24:1的氯仿：异戊醇中，充分混匀，静止1-2min，12000-13000g/min离心12-15min，取上清液；重复操作2-3次，得到含有DNA的上清水相。